化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 牙周膜成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1109 |
商品介紹：
名稱 牙周膜成纖維細胞 2.組織來源：牙周膜組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 人牙周膜成纖維細胞分離自牙周膜組織,；牙周膜（牙周韌帶,、牙周間隙）是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成。多數(shù)纖維排列成束,，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi),，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi),；牙周膜內(nèi)有神經(jīng),、血管,、淋巴和上皮細胞等。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的牙周膜成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁*,，伸展成梭形,，胞核清晰，分布較均勻,，散在生長,，不聚集成團；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長,，平坦,、胞體較大，細胞質(zhì)透明,，細胞核較大,，呈橢圓形，顏色淡,。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。牙周膜成纖維細胞（PLFs）作為牙周膜的主體細胞,，是牙周膜主要的間質(zhì)細胞,，它不僅具有合成膠原、基質(zhì),、彈力纖維和糖蛋白的功能,，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變,、修復及再生過程?，F(xiàn)在，利用牙周膜細胞建立體外模型,，已經(jīng)成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段,。 5.方法簡介： 實驗室分離的人牙周膜成纖維細胞采用膠原酶-胰蛋白酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的人牙周膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-H136 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%；CO2,，5% |
冷凍保存細胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大小,；
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s,，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s,，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
CXCL12 / SDF1b 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
EBI3 / IL27b 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
EBI3 / IL27b 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
ZAP 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CD146 / MCAM 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
CD146 / MCAM 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
VHR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
VHR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
CD106 / VCAM1 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽
eIF2a 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
牙周膜成纖維細胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interferon alpha-2
0.312-20 ng/mL 人高遷移率族蛋白B3(HMGB3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Peroxisome proliferator-activated receptor gamma
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human V(D)J recombination-activating protein 1
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphatidylcholine-sterol acyltransferase
31.2-2000 pg/mL 人Wnt-7a蛋白(Protein Wnt-7a)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Netrin receptor UNC5C
0.312-20 ng/mL 人氨肽Q(AP-Q)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Brain-specific serine protease 4
去氧膽酸鹽瓊脂（DC） 英文名稱：Desoxycholate Lactose Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
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