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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠臍靜脈內(nèi)皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1353 |
商品介紹：
名稱 大鼠臍靜脈內(nèi)皮細胞 2.組織來源：臍帶組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠臍靜脈內(nèi)皮細胞分離自臍帶組織；它是臍靜脈的重要結(jié)構(gòu)組成細胞之一,，在機體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用,。臍帶是哺乳類的連接胎兒和胎盤的管狀結(jié)構(gòu)，臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈,，卵黃囊的血管即臍腸系膜動脈及臍腸系膜靜脈,。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體部分出的毛細血管,，與胎盤的子體部胎兒毛細血管靠近,，在此處母體和胎兒的血液間進行CO2和O2，代謝產(chǎn)物即代謝廢物和營養(yǎng)物質(zhì)的交換,。臍動脈將胎兒產(chǎn)生的廢物運送至胎盤,，臍靜脈將O2和營養(yǎng)物質(zhì)從胎盤運送給胎兒。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠下腔靜脈內(nèi)皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠臍靜脈內(nèi)皮細胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R232 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內(nèi)皮細胞樣 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣,，95%,；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,；
2、PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,；
5、PBS沖洗細胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CNPY2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CALR / Calreticulin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CALR / Calreticulin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CALU / Calumenin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ROBO2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Interferon alpha-4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IL1R2 / IL1RB 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 EDAR 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 LTBR / TNFRSF3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IGFBP3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠臍靜脈內(nèi)皮細胞Bacillus thuringiensisBMP結(jié)合內(nèi)皮調(diào)節(jié)因子檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis磷脂C檢測試劑盒
Bacillus thuringiensisCC趨化因子配體24檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis雙皮質(zhì)檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis核糖核酸H檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis早期生長反應(yīng)蛋白2檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis甲基胞嘧雙加氧3檢測試劑盒
Bacillus thuringiensis甲基胞嘧雙加氧1檢測試劑盒
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