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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-13 09:02:50瀏覽次數(shù)：266
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X0729 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 雞骨骼肌細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0729 |
商品介紹：
名稱 雞骨骼肌細(xì)胞 2.組織來(lái)源：骨骼肌組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 雞骨骼肌細(xì)胞分離自四肢肌肉組織,；骨骼肌又稱橫紋肌,，肌肉中的一種，約占全身重量的40%,。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞,，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌,，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài),、結(jié)構(gòu)和功能的器官,，有豐富的血管、淋巴分布,，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張,，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀,、大小,、位置、起止點(diǎn),、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌,、菱形肌,、三角肌、梨狀肌等,。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀,，不分支，有明顯橫紋,，核很多,，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維,。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）,。明帶染色較淺,，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線,。H線的中部有一M線,。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線,。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段,，叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞,，細(xì)胞呈纖維狀,，不分支，有明顯橫紋,，核很多,，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行,，具有一定的方向性,。骨骼肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富,，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的雞骨骼肌細(xì)胞采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的雞骨骼肌細(xì)胞經(jīng)α-Sarcometric actin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-C011 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%,；CO2,，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法,；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄,，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕,；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率,；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一,、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5,、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二,、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min,，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
CXCL4 / PF4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GLIPR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CD120a / TNFRI 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ACVR1C / ALK-7 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LAIR2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
EGFL6 基因全長(zhǎng)ORF克隆
CHRDL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
PLA2G1B 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HDAC8 基因全長(zhǎng)ORF克隆
INSL3 基因全長(zhǎng)ORF克隆
雞骨骼肌細(xì)胞溶血（0.1%）赫氏瓊脂 英文名稱：Hottinger's Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g
含50ml 7.5%氯化鈉肉湯均質(zhì)袋 英文名稱：7.5% NaCl Broth 產(chǎn)品規(guī)格：10個(gè)/包
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ubiquitin-associated protein 2
曲瓊脂基礎(chǔ)(AFPA) 英文名稱：AFPA 產(chǎn)品規(guī)格：250g
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Major histocompatibility complex class I-related gene protein
SSDC培養(yǎng)基（ISO） 英文名稱：SSDC Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
78-5000 pg/mL 人腫瘤壞死因子配合基超家族成員18(TNFSF18)ELISA試劑盒
PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：500ml*20瓶
1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Dynamin-2
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Nestin
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