實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),,而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),,懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,易碎,,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,,但不宜過大,,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠雪旺氏細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1039 |
商品介紹:
名稱 小鼠雪旺氏細(xì)胞 2.組織來源:神經(jīng)組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介: 小鼠雪旺氏細(xì)胞分離神經(jīng)組織;周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞稱施萬(schwann,,又名雪旺細(xì)胞)細(xì)胞,,它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬細(xì)胞包裹在神經(jīng)纖維上,,這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維的施萬細(xì)胞的形態(tài)和功能有所差異,,施萬細(xì)胞的外表面有基膜,,能分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子,促進(jìn)受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生,,參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成,。施萬細(xì)胞的胞核呈長卵圓形,其長軸與軸突平行,,核周有少量胞質(zhì),。由于施萬細(xì)胞包在軸突的外面,故又稱神經(jīng)膜細(xì)胞(neurilemmalcell),,它的外面包有一層基膜,。施萬細(xì)胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱神經(jīng)膜(neurilemma),光鏡下可見此膜,。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中,,伴隨軸突一起生長的施萬細(xì)胞表面凹陷成一縱溝,,軸突位于縱溝內(nèi),溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜(mesaxon),。軸突系膜不斷伸長并反復(fù)包卷軸突,,把胞質(zhì)擠至細(xì)胞的內(nèi)、外邊緣及兩端(即靠近郎氏結(jié)處),,從而形成許多同心圓的螺旋膜板層,,即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬細(xì)胞的胞膜,,屬施萬細(xì)胞的一部分,。施萬細(xì)胞的胞質(zhì)除見于細(xì)胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外,,還見于髓鞘板層內(nèi)的施-蘭切跡,。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道,并與細(xì)胞外,、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通,。 5.方法簡介: 實驗室分離的小鼠雪旺氏細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。 6.質(zhì)量檢測: 實驗室分離的小鼠雪旺氏細(xì)胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M111 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形,、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,,95%;CO2,,5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二,、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
大鼠 LRFN3 基因全長ORF克隆
大鼠 OLR1 基因全長ORF克隆
大鼠 CLEC4A2 基因全長ORF克隆
大鼠 DSC2 基因全長ORF克隆
大鼠 CLEC4B2 基因全長ORF克隆
大鼠 CD36 基因全長ORF克隆
大鼠 CD34 基因全長ORF克隆
大鼠 KLRC1 基因全長ORF克隆
大鼠 CLEC2D 基因全長ORF克隆
大鼠 CLEC5A 基因全長ORF克隆
小鼠雪旺氏細(xì)胞HB-PET自誘導(dǎo)培養(yǎng)基 英文名稱:HB-PET Auto-Indection Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
乳酸桿菌選擇性瓊脂 英文名稱:Lactobacillus Selective Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.78-50 ng/mL 人肝細(xì)胞癌結(jié)合蛋白TD26ELISA試劑盒
FB1(Half-Fraser)添加劑 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:5ml*2
野生酵母培養(yǎng)基 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g
0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Tetranectin
鼠李糖發(fā)酵管 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支
0.156-10 ng/mL 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.312-20 ng/mL 人細(xì)胞質(zhì)硫氧還蛋白還原1(TR)ELISA試劑盒
七葉苷生化管 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支