實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法,;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理,;
3.蓋玻片非常薄,,易碎,取放蓋玻片時動作要輕,;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 TM3 (小鼠睪丸間質(zhì)細胞) 別稱TM-3 種屬小鼠 年齡(性別)雄性,,11-13天 組織來源睪丸間質(zhì) 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述TM3細胞在LH作用下cAMP產(chǎn)量升高,,但對促卵泡激素沒有響應(yīng)。TM3細胞對LH的響應(yīng)持續(xù)時間與血清批次有關(guān),;在LH存在下,,TM3細胞可以代謝 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM/F12+5% HS+2.5% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5% 溫度:37℃ 致瘤性No, The cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice, but did form colonies in semisolid medium. 受體表達情況luteinizing hormone (LH); epidermal growth factor (EGF); androgen receptor, positive; e種屬ogen receptor, positive; progesterone receptor, positive 基因表達情況prostaglandin F2a 注意事項該細胞貼壁松散,操作時請盡量輕柔,;換液時需預(yù)熱培養(yǎng)基,;收貨如有大塊脫落的細胞團,為正?,F(xiàn)象,,請按照收貨注意事項處理。 |
冷凍保存細胞之方法,?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。

實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng):
1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,將成1mm3左右大小,;
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織*被消化,;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;
二、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5,、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
牛窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)免疫試劑盒進口,、組裝
蛋白體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)免疫試劑盒進口,、分裝
大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)免疫試劑盒進口、分裝
犬胰島素樣因子3(INSL3)免疫試劑盒進口,、組裝
CXC趨化因子受體7(CXCR7)免疫試劑盒*直銷
低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒*直銷
馬皮質(zhì)酮(CORT)免疫試劑盒進口,、組裝
總蛋白S(TPS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠RAR的相關(guān)孤獨受體C(RORC)免疫試劑盒進口、組裝
TM3 (小鼠睪丸間質(zhì)細胞)
一步法96孔板質(zhì)粒DNAout(離心法)
一步法96孔板質(zhì)粒DNAout(真空法)(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)
一步法大提質(zhì)粒DNAout
一步法單菌落質(zhì)粒DNAout
一步法無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout
一步法質(zhì)粒DNAout2.0(100次)
一步法質(zhì)粒DNAout2.0(50次)
其它樣品DNA提取
血液游離DNAout(液體樣品DNAout)
一步式廣譜DNAout
DNA樣品污染去除
PCR抑制物清除劑
動態(tài)顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)
動態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒(見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品)
非酶RNA清除劑1.0
非酶RNA清除劑2.0
非酶多糖清除劑(DNA專用)