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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)中加樣需要注意哪些問(wèn)題

閱讀:267          發(fā)布時(shí)間:2017-10-11

目前elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體,、腫瘤標(biāo)志物,、激素、特種蛋白,、細(xì)胞因子和治療藥物等,。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響,,用于ELISA試劑盒測(cè)定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清(漿),,有時(shí)由于特定的檢測(cè)目的,也用到唾液,、腦脊液,、尿液、糞便等標(biāo)本,。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集,,要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。人ELISA試劑盒再如治療藥物的檢測(cè),,應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測(cè),。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將泛起顯著增高,。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,,會(huì)有一峰值泛起:生長(zhǎng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式開釋,,因此,,在測(cè)定此類激素時(shí),有必要在緊密親密相連的時(shí)間距離內(nèi)采取數(shù)份血樣本,,以其中間值為測(cè)定值,。
  臨床ELISA試劑盒測(cè)定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定模式,測(cè)定操作非常簡(jiǎn)單,,一般涉及到標(biāo)本的收集保存,、試劑準(zhǔn)備、加樣,、溫育,、洗板、顯色,、比色,、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面,其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果,,人ELISA試劑盒且尤以加樣,、溫育和洗板等步驟為甚。正確的加樣方法應(yīng)為45度,,吸頭貼著孔壁加入,,應(yīng)注意角度太小,會(huì)使液體殘留在孔壁上,,導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確,;吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處!
只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面:
首先要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),,其有類似過(guò)氧化物的活性,因此,,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8 ℃下保存一周,,如為有菌操作,,則建議冰凍保存。elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,,應(yīng)在-70 ℃以下,。樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),,其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用,;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè),。冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,,從而引起假陰性結(jié)果,。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,,不要進(jìn)行劇烈振蕩,,反復(fù)顛倒混勻即可。
三七皂苷 R1    20mg    含量測(cè)定    110745-200617
馬兜鈴酸 A    20mg    TLC檢查    110746-200507
樟腦    100mg    含量測(cè)定    110747-200507
α-香附酮    0.15ml    鑒別    110748-201010
梔子苷    20mg    含量測(cè)定    110749-200714
貝母素甲    20mg    含量測(cè)定    110750-200608
貝母素乙    20mg    含量測(cè)定    110751-200709
葛根素    20mg    含量測(cè)定    110752-200912
綠原酸    20mg    含量測(cè)定    110753-200413
人參皂苷 Re    20mg    含量測(cè)定    110754-200822
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書

 

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