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進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒有定性和定量兩種性能
閱讀:303 發(fā)布時間:2017-8-16進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的結(jié)果判定分為定性和定量兩種 ,在間接法和夾心法ELSIA中,,陽性孔呈色深于陰性孔,。在競爭法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽性孔,。那么兩類結(jié)果如何判斷呢,?南京森貝伽生物技術(shù)為您解析:
(1)間接法和夾心法
這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性,,顯色清晰者為陽性,。但在ELSIA中,正常人血清反應(yīng)后??沙霈F(xiàn)呈色的本底,,此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異,因此實驗中必須加測陰性對照,。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物,。在用肉眼判斷結(jié)果時,更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo),。
目視法簡捷明了,,但頗具主觀性。在條件許可下,,應(yīng)該用比色計測定吸光值,,這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本(sample,,S),、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值,,然后進(jìn)行計算,。計算方法有多種,,大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
a.陽性判定值
陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù),,以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn),。
用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定,試劑的制備必須標(biāo)準(zhǔn)化,,陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格,,須配用精密的儀器,并嚴(yán)格按規(guī)定操作,。陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標(biāo)本的實驗檢測而得到的?,F(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿,,陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng/ml,。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,,先計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),,兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400),試驗才有效,。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX,,并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,,則棄去,,而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍,,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算:陽性判定值=NCX+0.05,,標(biāo)本A值>陽性判定值的為陽性,,小于陽性判定值的為陰性。應(yīng)注意的是,,式中0.05為該試劑盒的常數(shù),,只適合于該特定條件下,而不是對各種試劑均可通用,。
根據(jù)以上敘述可以看出,,在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用,試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果,。
b.標(biāo)本/陰性對照比值
在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下,,進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后,,計算S/N值,。也有寫作P/N的,這里的P不代表陽性(positive),而是病人(patient)的縮寫,,不應(yīng)誤解,。為避免混淆,更宜用S/N表示,。在早期的間接法ELISA中,,有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準(zhǔn),現(xiàn)多為各種測定所沿用,。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值,。更應(yīng)注意的是,N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清,。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液,,以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此,,這類試劑盒規(guī),,如N<0.05(或其他數(shù)值),則按0.05計算,,否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果,。
(2)競爭法
在競爭法進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒中,陰性孔呈色深于陽性孔,。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量,,一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間,此時反應(yīng)zui為敏感,。
競爭法ELISA試劑盒不易用自視判斷結(jié)果,,因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異,一般均用比色計測定,,讀出S,、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種,,即陽性判定值法和抑制率法,。
sp185/HER-2 人可溶性蛋白185 規(guī)格: 48T/96T
B7-2/sCD86 人可溶性白細(xì)胞分化抗原86 規(guī)格: 48T/96T
sCD40L 人可溶性白細(xì)胞分化抗原40配體 規(guī)格: 48T/96T
sCD30L 人可溶性白細(xì)胞分化抗原30配體 規(guī)格: 48T/96T
sCD28 人可溶性白細(xì)胞分化抗原28 規(guī)格: 48T/96T
sP-selectin 人可溶性P選擇素 規(guī)格: 48T/96T
進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒