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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價格包被原的性質(zhì)很重要
這關(guān)系到做出的抗體可不可以被其識別，所以保存抗原很重要,，做重組蛋白時,，要在冰浴下緩慢融化。還有有的包被原可能不是蛋白,，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,。
1、親和素生物素：先親和素先包被載體,，加入生物素化的DNA,，這種包被方法均勻、牢固,，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。
2、脂類物質(zhì)：可將其在有機(jī)溶劑中溶解后加入ELISA板孔中,，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干,，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面,。
3,、小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
包被液的選擇
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價格一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液,。但有時由于試驗(yàn)的需要,，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。應(yīng)注意：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點(diǎn),、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),，故更易吸附到固相載體表面,。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去,。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
封閉
繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程,。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。
常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA,；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉,，可以高濃度使用（5%－10％）,；還有一些稀有用到的各種動物血清和酪蛋白等等。但zui終選用什么,，要依據(jù)試驗(yàn)具體來實(shí)踐,。
洗滌板
可以說在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈Φ鞍踪|(zhì)的吸附是普遍性的,，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì),，在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。所以在洗板時會有一定誤差,，人為因素很大（當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外）,，洗的不*或串了孔，對如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響,。
加抗體標(biāo)本（和二抗）
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒價格注意該換槍頭時換槍頭,。標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋,。如需加二抗,，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi),，太低則著色淺,。