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縮小elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)在實(shí)驗(yàn)中的誤差
閱讀:372 發(fā)布時(shí)間:2017-5-5(1)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器,、器械,,具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決,。
(2)使用校對(duì)過(guò)的微量移液器,,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要,。
(3) 評(píng)估試劑的實(shí)用性,。試劑的穩(wěn)定與否,對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要,。在試劑啟用前,,應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),,判定試劑符合要求后方可使用,。
(4)操作前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作,。不同批號(hào)的試劑不可混用,。值得改進(jìn)的地方,,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn),比如洗板次數(shù)的掌握等,。
(5) elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)加樣要準(zhǔn)確,、快速?;瘜W(xué)理論表明,,生成物的量與反應(yīng)物的量成正相關(guān)。加樣不準(zhǔn)確,,酶生成物的量不能確定,,直接影響顯色結(jié)果。另外,,顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),,所以加樣應(yīng)慎重,。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,,而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,,尤其室溫過(guò)高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效,。
(6)洗滌*,。洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性,。另外,,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,,也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。
(7)嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間,。反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),,酶失活;反應(yīng)時(shí)間過(guò)短,,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,,都可能造成假陰性,。
(8)elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間。顯色時(shí)間過(guò)短,,加入終止液反應(yīng)終止后,,底物結(jié)合物的量過(guò)少,,易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,,應(yīng)判為假陽(yáng)性,,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,,不可報(bào)陽(yáng)性,,這可能是本底顯色的結(jié)果。