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避免elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書實驗過程中的過失
閱讀:261 發(fā)布時間:2017-3-15elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書具有靈敏性高、特異性強等特點,,那怎樣避免ELISA實驗過程中的過失呢,?
*:檢驗技師應具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器,、器械,,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決,。
第二:操作前仔細閱讀elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書說明書,,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用,。值得改進的地方,,反復試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數(shù)的掌握等,。
第三:評估試劑的實用性,,試劑的穩(wěn)定與否,對準確率的高低到頭重要,。在試劑啟用前,,應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗,,判定試劑符合要求后方可使用,。
第四:加樣要準確、快速,。加樣不準確,,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果,。另外,,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重,。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,,如果加樣遲緩,,便出現(xiàn)誤差,,而且試劑長時間暴露在外,,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效,。
第五:使用校對過的微量移液器,,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要
第六:嚴格掌握顯色時間,,顯色時間過短,,加入終止液反應終止后,底物結(jié)合物的量過少,,易出現(xiàn)假陰性,。超過顯色要求時間后顯色,應判為假陽性,,這可能與試劑本身有關,。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,,這可能是本底顯色的結(jié)果,。
第七:洗滌*,洗板不*,,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性,。另外,洗滌液要新鮮,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性,。
第八:elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書嚴控反應時間,,反應時間過長,酶失活,;反應時間過短,,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,,容易洗掉,,都可能造成假陰性。