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小鼠糖原合成酶激酶（GSK）ELISA免費代測試劑盒?使用方法
閱讀：60 發(fā)布時間：2022-5-27| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.6KB |
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試驗原理：
是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將待測物質(zhì)和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A,、B,，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系,。
分析類型：夾心ELISA
樣本類型：血清、血漿,、組織,、尿液、及相關(guān)液體等樣本
產(chǎn)品型式：48/96孔板,，可拆
貯存方法：試劑盒未拆開,，4℃保存。已拆開,，標準品-20℃保存,，其它4℃保存。
運輸條件：4℃
樣本體積：50μl
自備材料
1）蒸餾水,。
2）酶標儀(450nm）
3）高精度加樣及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL
4）振蕩器及磁力攪拌器等,。5）37℃恒溫箱。
1）避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
2）實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
樣品收集,、處理及保存方法
1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2）血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
小鼠糖原合成酶激酶（GSK）ELISA免費代測試劑盒試劑的準備
1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。
操作步驟
1）使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi),。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時,。
4）甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
7）每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8）取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果,。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值,。
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結(jié)果,。
1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。
結(jié)果判斷與分析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的待測物質(zhì)標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線，樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
實驗原理: 用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標本或者標準品,、生物素化的抗體,、HRP-標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。 顏色的深淺和樣品中的目標蛋白呈正相關(guān)。用酶標儀在（450nm）波長下測定測定OD值（吸光度）,，計算樣品濃度,。