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牛短鏈脂肪酸ELISA檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)
閱讀:90 發(fā)布時間:2022-5-6提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 18.9KB |
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牛短鏈脂肪酸ELISA檢測試劑盒說明書
優(yōu)勢:
1,、原裝抗體----高效,、靈敏、特異性好
2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻,、吸附性好、空白值低,、孔底透明度高
3,、先進(jìn)的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強
4,、高標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)要求:靈敏度高,,特異性強
5、適用范圍廣:血漿,、血清,、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類型的樣本
牛短鏈脂肪酸ELISA檢測試劑盒檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),。往預(yù)先包被組胺(HIS)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的組胺(HIS)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度,。
樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
自備物品
酶標(biāo)儀(450nm)
高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
37℃恒溫箱
牛短鏈脂肪酸ELISA檢測試劑盒操作注意事項
試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,,這屬于正常現(xiàn)象,,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存,。
濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白,;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
所有液體組分使用前充分搖勻,。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無
標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無
樣本稀釋液6mL3mL無
檢測抗體-HRP10mL5mL無
20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋
底物A6mL3mL無
底物B6mL3mL無
終止液6mL3mL無
封板膜2張2張無
說明書1份1份無
自封袋1個1個無
注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0,、12.5、25,、50,、100、200 mg/L
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法
手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,,在吸水紙上拍干,如此洗板5次,。
自動洗板機:每孔注入洗液350μL,,浸泡1min,洗板5次,。
牛短鏈脂肪酸ELISA檢測試劑盒操作步驟
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
樣本孔先加待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加,。
除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
每孔加入底物A,、B各50μL,,37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL,,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),,對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,,按曲線方程計算各樣本濃度值,。
試劑盒性能
準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900,。
靈敏度:低檢測濃度小于1.0 mg/L,。
特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。
貯藏:2-8℃,避光防潮保存,。
有效期:6個月
免責(zé)聲明
試劑盒僅供研究使用,,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,,由實驗者承擔(dān),,本公司概不負(fù)責(zé)。
嚴(yán)格按照說明書操作,,實驗者違反說明書操作,,后果由實驗者承擔(dān),。