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人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒說明書
閱讀：52 發(fā)布時間：2022-4-22| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.6KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 52次 |
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人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒說明書
ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結果,，認為ELISA法具有靈敏,、特異、簡單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,，可概括四個方面：
1,、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。
2,、研究抗酶抗體的合成,。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應,。
4,、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒 組成 :
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片（48） 2片（96）
密封袋 1個 1個
酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標準品 0.3ml×6瓶 0.3ml×6瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
檢測抗體-HRP 5ml×1瓶 10ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
20*洗滌緩沖液 25ml×1瓶 15ml×1瓶 2-8℃保存
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒需自備的設備及試劑：
1.450±10nm濾光片酶標儀（建議儀器使用前預熱）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL.
3.Eppendorf 移液器.
4.蒸餾水或去離子水.
5.脫脂棉吸水紙.
6.37℃恒溫箱.
7.100ml和1000ml量筒.
8.準備若干個標準品稀釋管.
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒注意事項
1.試劑準備：所有試劑都必須在使用前達到室溫,，使用后請立即按照說明書要求保存,。實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染,。
2．加樣：加樣時,，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,，否則將會導致不同的預孵育時間,，從而影響實驗的準確性以及重復性；一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),，如果樣本數(shù)量過多,，可使用多道移液器,。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育，嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行,。
4.洗滌：洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標儀讀數(shù),。
5.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,，10分鐘左右)，如果顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,。
6.建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高,，應對樣品進行稀釋,，計算結果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,，試用幾個標本),，如果對本試劑盒有任何疑問,，可和所購經(jīng)銷商,，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調(diào)換,，但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘,。實驗過程應在室溫(20-25℃)內(nèi)進行,。
2. 取出酶標板，按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中,。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品,，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素,；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔,！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標板用封口膠密封后,，37℃孵育反應 1小時,；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標板3-5次，保持各孔有充足的水壓,；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干,；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl,；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應15分鐘,；
11.各孔加入50μl終止液,，終止反應；
結果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值,；
2. 以OD值為縱坐標,，以標準品的濃度為橫坐標，繪制曲線圖,；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應的濃度范圍,；