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人ADAM12（Meltrin-α）ELISA試劑盒使用方法
閱讀：72 發(fā)布時間：2020-8-28人ADAM12(Meltrin-α)ELISA試劑盒說明書
實驗原理
是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被兔α2巨球蛋白(A2M)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的兔α2巨球蛋白(A2M)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度,。
樣本處理要求
1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心,。
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能人上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7.不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
品優(yōu)勢
1. 品種齊全、質(zhì)量可靠,、靈敏度高,、操作簡便、穩(wěn)定性好,。
2. 特異性強(qiáng)：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
3. 重復(fù)性好：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% ,。
4. 同城（上海）需要代測可免費(fèi)上門取樣,，享送貨上門服務(wù)。
5. 根據(jù)客戶需求專業(yè)定制elisa試劑盒并提供免費(fèi)代測服務(wù),。
6. 臻科生物可提供專業(yè)技術(shù)服務(wù),全方為您解決實驗進(jìn)程中所遇到一切實驗問題,。
四、ELISA試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
8孔×12條
8孔×6條
無
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無
樣本稀釋液
6mL
3mL
無
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
無
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說明書進(jìn)行稀釋
底物A
6mL
3mL
無
底物B
6mL
3mL
無
終止液
6mL
3mL
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注意事項
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品,。
10. 實驗還需要酶標(biāo)儀（450nm）,，37℃恒溫箱，高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL以及蒸餾水或去離子水。
11. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。
12. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
13. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
實驗結(jié)果計算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程,，計算出樣品的濃度,。
八、關(guān)于兔α2巨球蛋白(A2M)定量ELISA試劑盒的特別說明
公司長期專業(yè)供應(yīng)各類科研產(chǎn)品,，包括ELISA試劑盒,、農(nóng)殘試劑盒,、放免試劑盒、生物試劑,、檢測卡等優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。