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合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒使用方法
閱讀：97 發(fā)布時間：2020-4-30合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒說明書
產(chǎn)品名稱：合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒
英文名稱：Cortex albiziae
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,，在DNA聚合酶與啟動子的參與下,，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,，通過溫度變化控制DNA的變性和復性,，并設計引物做啟動子,，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制,。（ DNA高溫變性低溫復性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶,，使PCR技術變得非常簡捷,、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用,，并逐步應用于臨床,。
使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,，95℃保溫10-15 分鐘,，加入0.1 mL 溶液B，混勻,，直接取上清液（相當于PCR 體積的1/10）作為模板進行PCR,。剩余樣品可以放4℃保存。
技術特點：
1準確可靠,，臨床雙盲對照試驗＞1000例,，結(jié)果與金標準測序法比對，結(jié)果*性大于99%,。
2高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA,。
3快速：整個檢測流程只需3小時。
4簡便：試劑盒提供預混好的試劑,，使體系配置操作簡便,。
5防污染
6產(chǎn)品僅用于科研高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結(jié)果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結(jié)合必需*配對,，才能延伸,。探針特異性與所檢測基因的PCR產(chǎn)物配對，在延伸中產(chǎn)生熒光,。
產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用,，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設計的專一性引物,，與相關病毒無交叉反應,。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,，避免后續(xù)污染,。
5. 產(chǎn)品僅用于科研本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞,、血液,、細菌等很多材料，不同的樣本有不同要求,，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況,；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種,、基因準確的名稱和ID號,；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰,，也可以保存于Trizol液中,。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加,。運用該技術可以對DNA,、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的*定量分析,、基因表達差異分析,、基因分型。
主要技術：引物設計,、RNA提取,、cDNA合成、qPCR
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合,；
②堿基配對原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性,。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度,。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),，其特異性程度就更高。
(2) 合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞,；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位),；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌,。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,，一次性地將反應液加好后,，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應,。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,，不一定要用同位素，無放射性污染,、易推廣,。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板,?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液,、洗嗽液,、毛發(fā)、細胞,、活PCR技術概論,。
?運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存,，保存期限一年,。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定,，具體見使用方法）,。