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小鼠粘蛋白/粘液素C（MUCC）酶聯免疫分析試劑盒使用方法
閱讀：514 發(fā)布時間：2020-2-14| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 20.2KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數 | 514次 |
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小鼠粘蛋白/粘液素C(MUCC)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍： 96T
0.6μg/L -25μg/L
使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中粘蛋白/粘液素C(MUCC)含量,。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠粘蛋白/粘液素C(MUCC)水平,。用純化的小鼠粘蛋白/粘液素C(MUCC)抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入粘蛋白/粘液素C(MUCC),，再與HRP標記的粘蛋白/粘液素C(MUCC)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的粘蛋白/粘液素C(MUCC)呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠粘蛋白/粘液素C(MUCC)濃度,。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（40μg/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
?標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
20μg/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
10μg/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
5μg/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.5μg/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.25μg/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
?加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
?溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
?配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
?洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
?加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
?溫育：操作同3。
?洗滌：操作同5,。
?顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
?終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
?測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數,；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數,，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數量多，推薦使用排槍加樣,。
?請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
?封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6個月