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人III型前膠原ELISA檢測試劑盒使用方法
閱讀：536 發(fā)布時間：2018-10-9| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 140.1KB |
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| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數 | 536次 |
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人III型前膠原ELISA檢測試劑盒試驗原理：
PC-III試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知PC-III濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將PC-III和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物,，然后加入底物A、B,，和酶結合物同時作用,。產生顏色。顏色的深淺和樣品中PC-III的濃度呈比例關系,。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質,。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。
人III型前膠原ELISA檢測試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作步驟
使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產生加樣上的誤差,。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據自己的數量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內,。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數增加一次,。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果,。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內,、板間變異系數均小于10%。
人III型前膠原ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的PC-III標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線,，樣品的PC-III含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3,、檢測值范圍：0-800ng/ml
4,、敏感度： 1.0 ng/ml