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人胞漿型磷脂酶A2ELISA檢測試劑盒使用方法
閱讀：141 發(fā)布時間：2018-6-28| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 116.1KB |
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人胞漿型磷脂酶A2ELISA檢測試劑盒試驗原理：
cPLA2試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知cPLA2濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將cPLA2和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經過溫育和洗滌,，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A,、B,，和酶結合物同時作用。產生顏色,。顏色的深淺和樣品中cPLA2的濃度呈比例關系,。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存,。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質,。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
樣品收集,、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
人胞漿型磷脂酶A2ELISA檢測試劑盒操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差,。
2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,，能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內,。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次,。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果,。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
6號標準品以上的結果為非線性的,，根據此標準曲線無法得到的結果,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內,、板間變異系數均小于10%,。
人胞漿型磷脂酶A2ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的cPLA2標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線,，樣品的cPLA2含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
3、檢測值范圍：0-400U/ml
4,、敏感度： 1.0 U/ml