化工儀器網(wǎng)
資料下載
人補體8ELISA檢測試劑盒使用說明書
閱讀：137 發(fā)布時間：2018-2-24| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 239.9KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 48次 | |
| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 137次 |
| 免費下載 | 點擊下載 |
人補體8ELISA檢測試劑盒試驗原理：
C8試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知C8濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測,。先將C8和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物,，然后加入底物A,、B，和酶結合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中C8的濃度呈比例關系。
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A,、B,。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗,。
2． 實驗中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
人補體8ELISA 檢測試劑盒
操作注意事項
1． 試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存,。
2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質,。
3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7． 底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9． 按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
人補體8ELISA檢測試劑盒操作步驟
1． 使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內,。
3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4． 甩去孔內液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8． 取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果,。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于10%,。
人補體8ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的C8標準品濃度為橫坐標（X）,，做得相應的曲線，樣品的C8含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
3,、檢測值范圍：0-8.0g/L
4、敏感度： 0.01 g/L