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人卵清蛋白特異性IgEELISA檢測試劑盒技術(shù)參數(shù)
閱讀：161 發(fā)布時間：2018-1-5| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 116.1KB |
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人卵清蛋白特異性IgEELISA檢測試劑盒試驗原理：
OVA-IgE試劑盒是間接法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知OVA-IgE濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將OVA-IgE和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后，加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中OVA-IgE的濃度呈比例關(guān)系,。
自備材料
1．蒸餾水。
2．加樣器：5ul,、10ul,、50ul,、100ul,、200、500ul,、1000ul,。
3．振蕩器及磁力攪拌器等,。
安全性
1．避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。
2．實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
1．試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,，不可保存。
2．實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。
3．不用的其它試劑應包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A,、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6．洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7．底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值。
8．加入試劑的順序應一致,，人卵清蛋白特異性IgEELISA檢測試劑盒以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9．按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作,。
人卵清蛋白特異性IgEELISA檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1,、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、保存------如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
試劑的準備
標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備,，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。
2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1．使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。
3．加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7．每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8．取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結(jié)果,。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值,。
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與人其它細胞因子反應,。
3. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人卵清蛋白特異性IgEELISA檢測試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標（Y）,，相應的OVA-IgE標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線,，樣品的OVA-IgE含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
3,、檢測值范圍：0-8.0IU/ml
4、敏感度： 0.01 IU/ml