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人抗酒石酸酸性磷酸酶elisa試劑盒說明書
閱讀：164 發(fā)布時間：2017-12-28| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 64KB |
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| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 164次 |
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人抗酒石酸酸性磷酸酶elisa試劑盒實驗原理：
本 試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）水平,。用純化的人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）,，再與HRP標(biāo)記的抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）抗體結(jié) 合,，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP5b）濃度。
人抗酒石酸酸性磷酸酶elisa試劑盒操作步驟：
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋： 本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） ,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
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10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） ,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
人抗酒石酸酸性磷酸酶elisa試劑盒注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD 值） ,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定， 計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） ,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．人抗酒石酸酸性磷酸酶elisa試劑盒本試劑不同批號組分不得混用,。