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人抗苗勒氏管激素(AMH)ELISA 檢測試劑盒技術參數(shù)

閱讀:185          發(fā)布時間:2017-12-14
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人抗苗勒氏管激素(AMH)ELISA檢測試劑盒試驗原理:
AMH試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知AMH濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將AMH和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,,加入親和素標記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,,然后加入底物A,、B,,和酶結合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中AMH的濃度呈比例關系,。
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:400pmol/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗AMH抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
自備材料
1. 蒸餾水,。
2. 加樣器:5ul、10ul,、50ul,、100ul、200ul,、500ul,、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等,。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,,請盡快用水沖洗,。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
操作注意事項
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存,。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7. 底物A應揮發(fā),,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9. 按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
人抗苗勒氏管激素(AMH)ELISA檢測試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、 保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,,不能儲存,。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
400 pmol/L (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
200 pmol/L (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pmol/L (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pmol/L (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 pmol/L (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 pmol/L (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pmol/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul,。
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
1. 使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復孔的盡量做復孔,。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時,。
4. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8. 取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
建議使用的實驗方案
 標準品濃度(pmol/L) 
A 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 12.5 12.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號標準品以上的結果為非線性的,,根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應,。
3. 重復性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。
人抗苗勒氏管激素(AMH)ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的AMH標準品濃度為橫坐標(X),,做得相應的曲線,,樣品的AMH含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3,、檢測值范圍:0-400pmol/L
4,、敏感度: 1.0 pmol/L

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