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人轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1ELISA檢測試劑盒使用說明書
閱讀:114 發(fā)布時間:2017-10-31提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 140.1KB |
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人轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1ELISA檢測試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知TGF-β1濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測,。先將TGF-β1和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,,然后加入底物A、B,,和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TGF-β1的濃度呈比例關(guān)系,。
操作注意事項
1.試劑應按標簽說明書儲存,,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,,不可保存,。
2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,,以免變質(zhì),。
3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水,。
7.底物A應揮發(fā),,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。
8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。
9.按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
人轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1ELISA檢測試劑盒樣品收集,、處理及保存方法
1,、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4,、保存------如果樣品不立即使用,,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
人轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1ELISA檢測試劑盒操作步驟
1.使用前,,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔,。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時,。
4.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7.每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8.取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應立即測定結(jié)果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值,。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1,、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),,相應的TGF-β1標準品濃度為橫坐標(X),,做得相應的曲線,樣品的TGF-β1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。
3,、檢測值范圍:0-400pmol/L
4、人轉(zhuǎn)移趨化生長因子β1ELISA檢測試劑盒敏感度: 1.0 pmol/L