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魚血紅蛋白γ(HBG1)ELISA檢測試劑盒檢測原理：
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品,、待測樣本加入到預(yù)先包被血紅蛋白γ(HBG1)透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標工作液,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中血紅蛋白γ(HBG1)濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中血紅蛋白γ(HBG1)含量,。
【魚血紅蛋白γ(HBG1)ELISA檢測試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2,、 標準規(guī)格酶標儀
3,、 精密移液器及一次性吸頭
4、 蒸餾水
5,、 一次性試管
6,、 吸水紙
【魚血紅蛋白γ(HBG1)ELISA檢測試劑盒操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加,。
7、溫育：重復4的操作,。
8,、洗板：重復5的操作。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min,。
10、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。
12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
魚血紅蛋白γ(HBG1)ELISA檢測試劑盒樣本要求：
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復凍融。
3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒,。
【魚血紅蛋白γ(HBG1)ELISA檢測試劑盒注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2、酶標包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（0.1-200ng/ml范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間,。
7、為避免交叉污染,，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜,。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。
9、魚血紅蛋白γ(HBG1)ELISA檢測試劑盒底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。