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犬免疫球蛋白G（IGG）elisa試劑盒試驗原理 

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中犬免疫球蛋白G(IGG)的水平。向預(yù)先包被了犬免疫球蛋白G(IGG)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入免疫球蛋白G(IGG),，溫育,；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IGG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,，形成免疫復(fù)合物,，再經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶,，然后加入底物A、B,，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺與樣品中犬免疫球蛋白G(IGG)的濃度呈正相關(guān)。

標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
犬免疫球蛋白G（IGG）elisa試劑盒操作程序
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
480μg/ml
（5號標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
240μg/ml
（4號標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
120μg/ml
（3號標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60μg/ml
（2號標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30μg/ml
（1號標(biāo)準(zhǔn)品）
120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗IGG抗體,，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液,，其余各步操作相同,；2）標(biāo)準(zhǔn)品孔：加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl，鏈霉素-HRP50μl（標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,，故不加）,；3)待測樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- IGG抗體10μl,、鏈酶親和素-HRP50μl,，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育60分鐘,。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘,。
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行,。
9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,。犬免疫球蛋白G（IGG）elisa試劑盒也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。