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人抗BB抗體（BBAb）ELISA試劑盒檢測原理
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品,、待測樣本加入到預先包被抗BB抗體（BBAb）透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分,，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中抗BB抗（BBAb）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中抗BB抗體（BBAb）含量,。
人抗BB抗體（BBAb）ELISA試劑盒操作步驟
1、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上,，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加,。
7、溫育：重復4的操作,。
8,、洗板：重復5的操作。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min,。
10,、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
人抗BB抗體（BBAb）ELISA試劑盒樣本要求
1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2,、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗，可將標本放于20℃保存,，但應避免反復凍融,。
3、樣本應充分離心,，不得有溶血及顆粒,。
人抗BB抗體（BBAb）ELISA試劑盒注意事項
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2,、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5,、本試劑盒定量范圍為0.1200ng/ml,，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（0.1200ng/ml范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間,。
7、為避免交叉污染,，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜,。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。 
9、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。