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神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞；H4操作步驟
閱讀：145 發(fā)布時間：2024-11-27神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,；H4操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,，用無菌 PBS,、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清,。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min,， 不同的細(xì)胞消化時間有所不同,。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化,；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液,。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實驗,。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,，未及吹打細(xì)胞,，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來,。1000～2000g 離心 1min,，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后,，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,，即可用于后續(xù)實驗。
2,、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,，通常以消化后可以充分打散組織為宜。
在組織的消化過程中,，首先需將選取的組織樣本剪切成細(xì)小的碎片,，以便于消化酶更好地滲透和作用。隨后,，將這些碎片轉(zhuǎn)移至含有適量生物 Trypsin-EDTA solution 或其他適宜組織消化酶的容器中,，根據(jù)組織的類型和硬度，消化時間可從數(shù)分鐘至數(shù)小時不等,，期間需不時觀察并輕柔振蕩,，以促進(jìn)消化均勻進(jìn)行,。
當(dāng)觀察到組織碎片已明顯分散成單個細(xì)胞或較小的細(xì)胞團(tuán)塊時，表明消化過程基本完成,。此時,，應(yīng)立即終止消化，可通過加入含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)液來中和消化酶,。使用吸管或移液器輕輕吹打消化液,，以促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)一步分散。
之后,，將含有消化后細(xì)胞的懸液通過細(xì)胞篩網(wǎng)過濾,，以去除未消化的組織碎片和雜質(zhì)。接著,，將過濾后的細(xì)胞懸液進(jìn)行離心處理,，轉(zhuǎn)速同樣控制在1000～2000g，離心時間1～2分鐘,，以沉淀細(xì)胞,。離心后，小心吸除上清液,，再加入含血清的培養(yǎng)液,，輕輕吹打重懸細(xì)胞，使其達(dá)到適宜的濃度和活性狀態(tài),，為后續(xù)的實驗操作如細(xì)胞培養(yǎng)、分析或分離特定類型細(xì)胞等做好準(zhǔn)備,。