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豬特定基因序列PCR檢測試劑盒使用方法:

一、樣品 DNA 的制備

用自選方法提取 Cps DNA,。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度,。

二,、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染原,，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照,。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 6，5,，4,，3，2 和 1 號(hào),。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭,，下同）。

3. 產(chǎn)品僅用于科研先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,，建議每次稀釋 10 倍,，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。

4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震蕩 1 分鐘,，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。

5. 換槍頭,，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。

6. 換槍頭,，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照,。

8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù),。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,，并以之為縱軸,，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。