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大鼠c-fos elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟：

1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照 50µl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl,，然后再加待測樣品 10µl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用,。

5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此 重復(fù) 5 次，拍干,。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外,。

7.溫育：操作同 3,。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。

計算和結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)陰性 陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為金黃色葡萄球菌腸毒素(SE)陽性。

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