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人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物?操作要點(diǎn)
閱讀：201 發(fā)布時(shí)間：2022-10-20人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱,；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管,，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管,，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中,，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染,。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),，輕輕吹打液體,，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度,，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡,。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),。
4）800rpm離心5min,，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，吹打制成細(xì)胞懸液,。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng),。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞,。繼續(xù)培養(yǎng),，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn),。
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
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羽扇豆根瘤菌 Bradyrhizobium lupini
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