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秋行軍蟲(chóng)卵巢細(xì)胞Sf9克隆株細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091),，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存,。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍,，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM,，常溫條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL17 / TARC 蛋白

重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL21 / 6Ckine 蛋白

重組人 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

重組小鼠 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白

重組食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CCL8 / MCP-2 蛋白 (His & NusA 標(biāo)簽)

重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白

重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113， His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CXCL2 / GRO2 / MIP-2 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

重組人 CCL17 / TARC / SCYA17 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標(biāo)簽)

重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標(biāo)簽)

重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 CXCL16 / SR-PSOX 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組人 CCL5 / RANTES 蛋白 (His & mucin 標(biāo)簽)

重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77)