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技術(shù)文章

火雞腸炎科研性PCR檢測試劑盒使用方法

閱讀:162          發(fā)布時間:2022-6-29

火雞腸炎科研性PCR檢測試劑盒使用方法:

測定法的靈敏度來自作為報告的酶,。酶是一種有機(jī)催化劑,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系,。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 12μg/ml    4號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 3μg/ml     2號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。|

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干,。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外,。

7. 溫育:操作同3,。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

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