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?人參源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則
閱讀：176 發(fā)布時間：2022-3-17人參源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:
1, 先選擇好探針,然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針,。
2, 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp,理想的*能在100-150bp內(nèi),擴(kuò)增片斷約短,有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng),從而會導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低,及在SG分析中非特異信號,。
4, 為了保證效率和重復(fù)性,應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續(xù)的G)
5, 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測,以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成,。
b),探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1,在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2,探針的Tm值應(yīng)在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應(yīng)效率,這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針,。
6, 探針應(yīng)盡可能的短,不要超過30個bp,。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
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