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家蠶卵黃蛋白(LT)ELISA檢測試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一,、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,，混勻,；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L,，120 ng/L ,，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）,。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘,。

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