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無乳支原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒應(yīng)用案例
閱讀:210 發(fā)布時間:2021-5-25無乳支原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒應(yīng)用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。,。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout,。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。產(chǎn)品僅用于科研
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分),。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照,。
2.標(biāo)記 6 個離心管,,分別為 7,,6,5,,4,,3,2,。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,,充分震蕩 1 分鐘,,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。5.換槍頭,,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用,。
6.換槍頭,,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照,。放冰上待用。
7.換槍頭,,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照,。放冰上待用,。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分,。產(chǎn)品僅用于科研
注意事項:1.基礎(chǔ)程序,;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間,;4.循環(huán)次數(shù),;5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理,;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué),;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。