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兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子ELISA試劑盒操作事項(xiàng)

閱讀:206          發(fā)布時(shí)間:2019-6-12

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng):
(1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
(2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,以免變質(zhì),。
(3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
(4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
(5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
(6)洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒樣本處理及要求:
1.  血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一夜,,然后1000×g離心20 分鐘,,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),,稱(chēng)重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融,。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,,取上清檢測(cè)。
4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請(qǐng)1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

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