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elisa試劑盒前期準(zhǔn)備工作和操作流程
閱讀:558 發(fā)布時間:2017-4-18進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒前期準(zhǔn)備工作:
實驗前樣本和試劑盒室溫平行1小時,如果樣本是凍存樣本,,應(yīng)提前拿到2-8攝氏度進(jìn)行解凍(不建議直接室溫解凍)
準(zhǔn)備好實驗所需耗材,,蒸餾水(去離子水)。
進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作流程:
1,,將要進(jìn)行實驗的版孔進(jìn)行設(shè)定好,,標(biāo)準(zhǔn)品5個點,,每個點設(shè)定平行,需要用到10個孔,,空白只需1個孔。剩下孔可以做為樣本孔
2,,稀釋標(biāo)準(zhǔn),,準(zhǔn)備好5個EP管,然后在每個EP管中加入150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液,,編上編碼,分別為1,,2,,3,,4,5,,在1號管中加入150標(biāo)準(zhǔn)品,用槍頭反復(fù)吹打10次左右(注意控制幅度不要過大容易產(chǎn)生氣泡)如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右,,然后換槍頭,,在1號管中取150微升加入到2號管,后面過程一次類推,。zui后稀釋完,前面4個管中每管液體在150微升,,5號管為300微升,。濃度是從大到小,。
3,標(biāo)準(zhǔn),、樣本、空白加樣:標(biāo)準(zhǔn)是每個濃度點2個孔(做平行),,每孔加入50微升,加樣過程中注意換槍頭,,樣本孔中每孔加入50微升,,加樣過程中注意換槍頭,,空白孔加入50微升蒸餾水,。特別要說明的是,,標(biāo)準(zhǔn)加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內(nèi)加完,,如果時間拖的太長,會導(dǎo)致前面孔先反應(yīng)后面孔才開始反應(yīng),,這樣數(shù)值偏差過大,。加完樣后蓋上封板膜,,至37攝氏度孵育30分鐘.
4,,洗版,,在孵育過程中可以將洗滌液配好,,20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可,。每孔加入250-300微升的洗滌液(不要漫過版孔),(如果有震蕩儀的話,,可以講板子放入震蕩儀上5秒左右,然后靜止三十秒,,沒有請忽略次過程)將板子在桌子上晃動5秒左右,然后靜置30秒,,甩干,拍板,。說明:甩干過程盡量要快,,1秒內(nèi)就可以完成,不要慢慢傾斜倒掉液體,,直接翻板甩掉液體即可,。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙,版孔朝下拍幾下,,拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成,。
5,每孔加入50微升的酶標(biāo)試劑,,此處在空白孔中不需要加(空白孔為空),,孵育30分鐘。
6,,洗版同步驟4
7,,顯色,,先每孔中加入50微升的顯色A液,然后每孔中加入50微升顯色B液,。避光37攝氏度顯色15分鐘
8,終止,,每孔加入50微升的終止液,注意,,加完終止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù),,超過時間讀數(shù)無效,。在規(guī)定時間內(nèi)讀數(shù)都是有效的。
至此,,整個實驗結(jié)束。
進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒在做完整個實驗過儀器之前,,儀器預(yù)熱半小時,這個計算好時間,,也可以直接將儀器一直開著,直到整個實驗結(jié)束,。
在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部,,一般槍頭都懸空,,可以將槍頭靠在孔邊緣,,但槍頭尖懸空,,如果槍頭上殘留液體看整體多少量,,不要吹打下去,。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔,。整個加液過程不要產(chǎn)生氣泡。