化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
elisa試劑盒前期準(zhǔn)備工作和操作流程
閱讀：494 發(fā)布時(shí)間：2017-4-18進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒前期準(zhǔn)備工作：
實(shí)驗(yàn)前樣本和試劑盒室溫平行1小時(shí)，如果樣本是凍存樣本,，應(yīng)提前拿到2-8攝氏度進(jìn)行解凍（不建議直接室溫解凍）
準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需耗材,，蒸餾水（去離子水）。
進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作流程：
1，將要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的版孔進(jìn)行設(shè)定好,，標(biāo)準(zhǔn)品5個(gè)點(diǎn),，每個(gè)點(diǎn)設(shè)定平行，需要用到10個(gè)孔,，空白只需1個(gè)孔,。剩下孔可以做為樣本孔
2，稀釋標(biāo)準(zhǔn),，準(zhǔn)備好5個(gè)EP管,，然后在每個(gè)EP管中加入150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，編上編碼,，分別為1,，2，3,，4,5,，在1號(hào)管中加入150標(biāo)準(zhǔn)品，用槍頭反復(fù)吹打10次左右（注意控制幅度不要過(guò)大容易產(chǎn)生氣泡）如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右,，然后換槍頭,，在1號(hào)管中取150微升加入到2號(hào)管，后面過(guò)程一次類(lèi)推,。zui后稀釋完,，前面4個(gè)管中每管液體在150微升，5號(hào)管為300微升,。濃度是從大到小,。
3，標(biāo)準(zhǔn),、樣本,、空白加樣：標(biāo)準(zhǔn)是每個(gè)濃度點(diǎn)2個(gè)孔（做平行），每孔加入50微升,，加樣過(guò)程中注意換槍頭,，樣本孔中每孔加入50微升，加樣過(guò)程中注意換槍頭,，空白孔加入50微升蒸餾水,。特別要說(shuō)明的是，標(biāo)準(zhǔn)加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內(nèi)加完,，如果時(shí)間拖的太長(zhǎng),，會(huì)導(dǎo)致前面孔先反應(yīng)后面孔才開(kāi)始反應(yīng)，這樣數(shù)值偏差過(guò)大,。加完樣后蓋上封板膜,，至37攝氏度孵育30分鐘.
4,，洗版，在孵育過(guò)程中可以將洗滌液配好,，20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可,。每孔加入250-300微升的洗滌液（不要漫過(guò)版孔），（如果有震蕩儀的話,，可以講板子放入震蕩儀上5秒左右,，然后靜止三十秒，沒(méi)有請(qǐng)忽略次過(guò)程）將板子在桌子上晃動(dòng)5秒左右,，然后靜置30秒,，甩干，拍板,。說(shuō)明：甩干過(guò)程盡量要快,，1秒內(nèi)就可以完成，不要慢慢傾斜倒掉液體,，直接翻板甩掉液體即可,。拍板過(guò)程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙，版孔朝下拍幾下,，拍干區(qū)別主要看吸水紙和濾紙上沒(méi)有明顯的水漬為完成,。
5，每孔加入50微升的酶標(biāo)試劑,，此處在空白孔中不需要加（空白孔為空）,，孵育30分鐘。
6,，洗版同步驟4
7,，顯色，先每孔中加入50微升的顯色A液,，然后每孔中加入50微升顯色B液,。避光37攝氏度顯色15分鐘
8，終止,，每孔加入50微升的終止液,，注意，加完終止液必須在15分鐘內(nèi)讀數(shù),，超過(guò)時(shí)間讀數(shù)無(wú)效。在規(guī)定時(shí)間內(nèi)讀數(shù)都是有效的,。
至此,，整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
進(jìn)口elisa酶聯(lián)免疫試劑盒在做完整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)儀器之前,，儀器預(yù)熱半小時(shí),，這個(gè)計(jì)算好時(shí)間,，也可以直接將儀器一直開(kāi)著，直到整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束,。
在加液過(guò)程中不要使槍頭觸及到板子底部,，一般槍頭都懸空，可以將槍頭靠在孔邊緣,，但槍頭尖懸空,，如果槍頭上殘留液體看整體多少量，不要吹打下去,。特別忌諱在版孔內(nèi)壁流向版孔,。整個(gè)加液過(guò)程不要產(chǎn)生氣泡。