日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

1,、elisa試劑盒包被原的性質(zhì)很重要,，蛋白濃度,，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,。還有有的包被原可能不是蛋白,，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，具體方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA,，這種包被方法均勻,、牢固，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。②脂類物質(zhì):可將其在有機溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中,，開蓋置冰箱或冷風(fēng)吹干,，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面,。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。

2,、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液,。但有時由于試驗的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包,。elisa試劑盒應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點,、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,，故更易吸附到固相載體表面,。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等,。

3,、封閉：繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠,；脫脂奶粉,，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）,；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等,。

4、洗滌板：可以說在ELISA操作中,，洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),。因為聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的,，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,。所以在洗板時會有一定誤差,，人為因素很大（當(dāng)然有條件的用洗板機除外），洗的不*或串了孔,，對如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響,。

5、加抗體標本(和二抗):注意該換槍頭時換槍頭,。標本稀釋一般可用pbs稀釋，也可用封閉液去稀釋,。如需加二抗,，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費,，太低則著色淺,。

6、顯色:顯色系統(tǒng)又很多,，我們一開始做的時候,，要選擇適宜的顯色系統(tǒng),。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉,。

7,、elisa試劑盒每次做盡量要把陰陽空三個對照做好，如出現(xiàn)問題也好分析,。