【應(yīng)用文章下載】抗血栓藥物引起的血小板鈣流變化檢測(cè)過程詳解-Molecular Devices

時(shí)間：2019-8-23 閱讀：700


抗血栓藥物引起的血小板鈣流變化檢測(cè)過程詳解
血小板是從骨髓成熟的巨核細(xì)胞胞漿解脫落下來的小塊胞質(zhì),，雖然僅占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.05% ,，但是它在血管損傷后的止血過程中起著重要作用,。除了自然止血外,，它還影響著血管中血栓的形成,，進(jìn)而形成血栓性疾病,，如心梗和缺血性中風(fēng)等,。
正常生理?xiàng)l件下，未受傷的血管系統(tǒng)中血小板不發(fā)生粘附,、活化和聚集,。血小板活化在血栓形成中起重要作用，活化可分為初級(jí)活化和進(jìn)一步活化,。進(jìn)一步活化中有很多活性物質(zhì)如膠原,、二磷酸腺苷(ADP)等都可以與血小板膜上相關(guān)受體結(jié)合，進(jìn)行進(jìn)一步激活,，如大家熟知的GPCRs受體,。血小板胞質(zhì)溶膠內(nèi)游離鈣離子濃度的變化在血小板進(jìn)一步激活中扮演至關(guān)重要的角色，當(dāng)其鈣離子升高會(huì)促進(jìn)血小板活化,，反之亦然。
鈣離子作為細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使,，參與了多數(shù)生物活動(dòng)過程,。血小板活化過程中伴隨著細(xì)胞內(nèi)鈣離子的跨膜內(nèi)流和血小板鈣庫(kù)的鈣離子釋放，鈣離子濃度升高后,，血小板鈣庫(kù)的質(zhì)膜上的鈣離子ATP酶將鈣離子重新轉(zhuǎn)運(yùn)回到鈣庫(kù)之中,。鈣離子流的變化是基于毫秒級(jí)別，不通過特殊,、有效的檢測(cè)手段很難在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量,、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
目前較為主流的細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)手段是熒光探針標(biāo)記法,，如 Flou-4 ,、Indo-1 、Fura-2等,。在眾多熒光探針種類中,，F(xiàn)ura-2熒光探針以其自身優(yōu)勢(shì)深受大家喜愛,，可直接用于微孔板讀板機(jī)系統(tǒng)或成像系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行觀察。傳統(tǒng) Fura-2 熒光探針需要每個(gè)步驟進(jìn)行清洗,，相對(duì)比較繁瑣,。Molecular Devices 出品的 Fura-2 QBT 具有*利的防止信號(hào)屏蔽的作用，F(xiàn)lexStation 3 是MD推出的一款內(nèi)置多通道自動(dòng)移液裝置,，具有的Flex模式可以在短時(shí)間（毫秒級(jí)）獲得有效信號(hào)強(qiáng)度,，兩者結(jié)合能讓您單位時(shí)間內(nèi)獲得準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果,。
圖一：FURA-2 QBT 鈣流實(shí)驗(yàn)的比值法分析

本次我們將介紹 Fura-2 QBT鈣流試劑盒在FlexStation 3 微孔板檢測(cè)平臺(tái)如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和軟件設(shè)置,，獲得相應(yīng)結(jié)果后如何分析。我們提供了可重復(fù),、可量化操作的解決方案,，適合于高通量血小板細(xì)胞鈣離子檢測(cè)的方式，可用于激動(dòng)劑EC50和拮抗劑IC50檢測(cè)和篩選工作,。