【應用文章下載】抗血栓藥物引起的血小板鈣流變化檢測過程詳解-Molecular Devices

時間：2019-8-23 閱讀：725


抗血栓藥物引起的血小板鈣流變化檢測過程詳解
血小板是從骨髓成熟的巨核細胞胞漿解脫落下來的小塊胞質，雖然僅占骨髓有核細胞總數(shù)的0.05% ，但是它在血管損傷后的止血過程中起著重要作用。除了自然止血外,，它還影響著血管中血栓的形成,，進而形成血栓性疾病,，如心梗和缺血性中風等,。
正常生理條件下,，未受傷的血管系統(tǒng)中血小板不發(fā)生粘附、活化和聚集,。血小板活化在血栓形成中起重要作用,，活化可分為初級活化和進一步活化。進一步活化中有很多活性物質如膠原,、二磷酸腺苷(ADP)等都可以與血小板膜上相關受體結合,，進行進一步激活，如大家熟知的GPCRs受體,。血小板胞質溶膠內(nèi)游離鈣離子濃度的變化在血小板進一步激活中扮演至關重要的角色,，當其鈣離子升高會促進血小板活化，反之亦然,。
鈣離子作為細胞內(nèi)重要的第二信使,，參與了多數(shù)生物活動過程。血小板活化過程中伴隨著細胞內(nèi)鈣離子的跨膜內(nèi)流和血小板鈣庫的鈣離子釋放,，鈣離子濃度升高后,，血小板鈣庫的質膜上的鈣離子ATP酶將鈣離子重新轉運回到鈣庫之中。鈣離子流的變化是基于毫秒級別,，不通過特殊,、有效的檢測手段很難在較短時間內(nèi)獲得大量、準確的實驗結果,。
目前較為主流的細胞內(nèi)鈣離子檢測手段是熒光探針標記法,，如 Flou-4 、Indo-1 ,、Fura-2等,。在眾多熒光探針種類中，F(xiàn)ura-2熒光探針以其自身優(yōu)勢深受大家喜愛,，可直接用于微孔板讀板機系統(tǒng)或成像系統(tǒng)對其進行觀察,。傳統(tǒng) Fura-2 熒光探針需要每個步驟進行清洗，相對比較繁瑣,。Molecular Devices 出品的 Fura-2 QBT 具有*利的防止信號屏蔽的作用,，F(xiàn)lexStation 3 是MD推出的一款內(nèi)置多通道自動移液裝置，具有的Flex模式可以在短時間（毫秒級）獲得有效信號強度,，兩者結合能讓您單位時間內(nèi)獲得準確,、可靠的結果。
圖一：FURA-2 QBT 鈣流實驗的比值法分析

本次我們將介紹 Fura-2 QBT鈣流試劑盒在FlexStation 3 微孔板檢測平臺如何進行實驗操作和軟件設置,，獲得相應結果后如何分析,。我們提供了可重復,、可量化操作的解決方案，適合于高通量血小板細胞鈣離子檢測的方式,，可用于激動劑EC50和拮抗劑IC50檢測和篩選工作,。