目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>細胞生物學>>外泌體研究>> abs50039血漿血清外泌體提取試劑盒
CAS | - | 純度 | - |
---|---|---|---|
分子量 | - | 分子式 | - |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20T |
貨號 | abs50039 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 適用于血清/血漿中的外泌體提取,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒 |
描述:
外泌體是由細胞分泌的包含 RNA 和蛋白質(zhì)的小囊泡(30-150 nm),,在血清/血漿中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能,,在特定細胞之間傳遞它們的效應物或信號分子,。
外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,本血漿血清外泌體提取試劑盒,,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,,適用于血清/血漿中的外泌體提取,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。
產(chǎn)品組分:
組分名稱 | 規(guī)格 | 保存 |
Solution A | 20ml | -20℃ |
Solution B | 5ml | 常溫 |
Exosome Purification Filter | 20 Tubes | 常溫 |
使用方法:
自備材料:
高速離心機(可達到 12000 rpm 轉(zhuǎn)速),,渦旋振蕩器,;1.5 mL 離心管,,PBS 緩沖液,、制冰機。
一,、樣品預處理:
1,、離心機在使用前先于 4℃預冷 10 min;
2,、取樣:如果是凍存樣品,,從冰箱取出后于 2-8℃條件下進行解凍;如果是新鮮樣品,,收集樣品后置于 2-8℃保存,;
3、將樣品按照 500 μL /管進行分裝,,不足部分用 1×PBS 補足至 500 μL,。
二、去除雜蛋白:
1,、Solution A 從試劑盒中取出后,,放置到冰箱冷凍層中至少 1 小時以上,取出預冷的Solution A 置于碎冰上,;
2,、加 Solution A:在 500 μL 血液樣品中加入 400 μL 預冷的 Solution A,立即將離心管蓋緊,,通過渦旋振蕩器充分混勻 30 s,;
3、離心去蛋白:將混勻后的樣品于 4℃以12000 rpm 離心 20 min,,去除樣品中的雜蛋白,;
4、上清液轉(zhuǎn)移:去除雜蛋白的離心上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL 離心管中,。
三,、提取外泌體:
1、加 Solution B:在去除雜蛋白的離心上清液中加入 120 μL 的 Solution B,;
2,、溶液混合:加入 Solution B 試劑后將離心管蓋緊,通過渦旋振蕩器充分混勻 2 min,;再放置于室溫下靜置 5 min,;
3,、沉淀外泌體:將裝有混合液的離心管于 4℃以 12000 rpm 離心 15 min,棄上清,;
4,、再次離心:將含有沉淀的離心管再次于 4℃以 12000 rpm 離心 2 min,棄上清(注:盡可能吸凈上清液),,并將 1.5 mL 離心管于室溫下敞口靜置 10 min,;
5、外泌體重懸:取 200 μL 的 1×PBS 均勻吹打離心沉淀物,,待其溶解后,,將重懸液轉(zhuǎn)移至新的 1.5 mL 離心管中;
6,、收獲外泌體顆粒:將含有重懸液的 1.5 mL離心管于 4℃以 12000 rpm 離心 5 min,,保留上清液,該上清液中富含外泌體顆粒,。
(注:此時可能有較多沉淀,,為正常現(xiàn)象)
四,、純化外泌體:
1,、外泌體純化:將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Filter(EPF 柱)上室中,于 4℃以 5600 rpm 離心 20 min,,離心后收集 EPF 柱管底的液體,,此液體即為純化后的外泌體顆粒;(注:EPF 柱不可重復使用)
2,、外泌體的保存:純化后的外泌體以50-100 μL 進行分裝保存于-80℃低溫冰箱中,,以備后繼實驗使用。
儲存/保存方法:
收到產(chǎn)品后將試劑分開儲存,,使用前請充分混勻,。