| 描述 | Blasticidin S（殺稻瘟菌素）,，也稱為滅瘟素S鹽酸鹽，稻瘟散,，從灰色鏈霉菌Streptomyces griseochromogenes分離到的一種核苷肽類抗生素,。主要通過干擾核糖體中肽鍵的形成來特異性抑制原核和真核細胞的蛋白質合成。殺稻瘟菌素S用于篩選攜帶bsr或BSD基因的轉染細胞,。殺稻瘟菌素S具有快速而強效的作用模式,，一個星期內完成陽性克隆的篩選，且很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡,。 Blasticidin S solution 本品為溶于HEPES buffer,，pH 7.5的無菌溶液，濃度為10mg/ml,。用于細菌篩選的常用濃度為25-100ug/ml,，用于哺乳動物細胞篩選的常用濃度為1-50ug/ml，初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度,。 |
| 使用方法 | Blasticidin S solution 使用濃度：
1,、大腸桿菌（E.coli），（常用濃度：25-100ug/ml）E.coli對Blasticidin S敏感性很弱,，但含Blasticidin S抗性的轉化子可在低鹽LB固體培養(yǎng)基（pH 8.0）100ug/ml Blasticidin S的條件下進行篩選,。高pH可增強抗生素篩選活性。
2,、哺乳動物細胞（常用濃度：1-50ug/ml）
哺乳動物細胞系BlasticidinS的常用工作濃度范圍1-50ug/ml,。初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。
操作步驟：
Blasticidin S常用濃度范圍1-50ug/ml,，以10ug/ml為多,，初次實驗建議通過滅殺曲線來確定最佳使用濃度。攜帶bsr或BSD基因的質粒轉染到細胞后,，用含有Blasticidin S的正常生長培養(yǎng)基來篩選穩(wěn)轉克隆,。
1、轉染48h后,，用含適宜濃度BlasticidinS的新鮮培養(yǎng)基將細胞傳代,；【注】：細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高,，抗生素效率降低,。分盤時覆蓋率最好不超過25%。
2,、每3-4天去除舊培養(yǎng)基,，加入含相同濃度BlasticidinS的新鮮培養(yǎng)基；
3,、7天后評估細胞集落形成,。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率,，集落形成可能需要再增加一周或更久。
轉移5-10個抗性克隆到35mm細胞培養(yǎng)盤,，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天,。隨后進行細胞毒性檢測。 |
| 注意事項 | 1,、Blasticidin S為有毒化合物，操作時需注意防護,，切勿與身體或皮膚直接接觸,。
2、為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。 |
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