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檢測原理:
Mouse IL-12 p70 ELISA Kit本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術,。特異性抗小鼠 IL-12 p70抗體預包被在高親和力的酶標板上,。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體,,經過孵育,,樣本中存在的 IL-12 p70與固相抗體和檢測抗體結合,形成免疫復合物,。洗滌去除未結合的物質后,,加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后,,加入顯色底物,,避光顯色。加入終止液終止反應,,在450 nm波長(參考校正波長540nm或570nm)測定吸光度值,。
檢測類型:雙抗夾心法
形式:預包被96孔板
檢測樣本類型:細胞上清液,血清,,血漿
上樣量:100ul
試劑盒組分:
預包被96孔板,、標準品、抗小鼠 IL-12 p70檢測抗體,、稀釋用緩沖液,、顯色液(A、B),、洗滌液,、終止液、SA-HRP,、封板膜和說明書一份,。
靈敏度:2.24 pg/mL
檢測范圍:39.1 - 2,500 pg/mL
回收率范圍:83-107%
保存方法:2-8℃
標準曲線圖
背景:
Mouse IL-12 p70 ELISA Kit白細胞介素 12(IL-12, 也稱 NKSF),, 是 70-75kDa 的異源二聚體糖蛋白,, 屬于 IL-12異源二聚體細胞因子家族。 IL-12 由 35 kDa(p35)和 40 kDa(p40) 的兩個亞基構成,這兩個亞基由二硫鍵相連,, 相互間無氨基酸序列同源性,。 成熟的 p35 亞基有 196 個氨基酸, 包含七個半胱氨酸及一個潛在的 N-連接糖基化位點,。 成熟的小鼠 p35 與人和大鼠的氨基酸同源性分別為 63%和 86%,。 成熟的小鼠 p40 亞基長 313個氨基酸, 包括 13 個半胱氨酸和 5 個潛在的 N-連接糖基化位點,。 有研究報道 p40 序列具有多態(tài)性,, 但 R&D systems 的這個 IL-12 p70 試劑盒不識別這些等位基因產物。
成熟的小鼠 p40 和人及大鼠的氨基酸同源性分別為 72%和 93%,。 雖然 p35類似于促紅細胞生成素的配體, 但 p40 更類似促紅細胞生成素受體的 N-端,, 有 WSXWS結構域,、 一個免疫球蛋白樣結構域和四個保守的半胱氨酸。 這表明 IL-12 可能是細胞因子受體模擬物,, 類似于 IL-6/可溶性 IL-6R 復合物,。 值得注意的是 p40可以以單體或同源二聚體形式存在, 而 p35 卻從來沒有發(fā)現單體形式,。 p40 是白介素 23(IL-23) 兩個亞基中較大的亞基,。 雖然 IL-12 一直被認為是一種分泌型分子, 人們在人和小鼠細胞中也發(fā)現了膜結合型 IL-12,。 產生 IL-12 的細胞包括巨噬細胞,、 樹突狀細胞、 單核細胞,、 朗格漢斯細胞,、 中性粒細胞、角質形成細胞,、 類漿樹突狀細胞,、 小膠質細胞、 CD8+ DC(僅小鼠細胞)和非生發(fā)中心的(CD38-CD44+) B 細胞(僅人體細胞),。
小鼠 IL-12 的高親和力受體是由至少 2 個 I 型跨膜糖蛋白組成,, 類似于細胞因子受體超家族成員。 第一個亞基(Rβ1) 為 100 kDa,, 以 Kd= 1nM 與 IL-12 結合,。 這個受體是 p40 亞基的主要結合位點; 第二個亞基(Rβ2) 為 130 kDa,, 與 Rβ1亞基無氨基酸同源性,。 這個受體是信號轉導的重要組成部分, 作為一個二硫鍵相連的 p30-p40 二聚體的附著點,。 如上所述,, 小鼠 p40 以單體,、 二聚體形式存在, 或于 p35 結合形成 IL-12,, 或于 p19 結合形成 IL-23,。 同源二聚體 p40 和 IL-23 都可以結合 IL-12R, 作為不傳遞信號的拮抗劑,。 或者 p40同源二聚體也可以與 Rβ1 結合,, 激活小膠質細胞和巨噬細胞。從功能上而言,, IL-12 已被證明能夠增強細胞毒性,、 誘導 NK 細胞、 T 細胞和樹突狀表皮 T 細胞產生γ干擾素,。 有報道表明,, IL-12 能誘導巨噬細胞產生γ干擾素。 與 IL-23 和 IL-27 等其 IL-12 的家族成員一起,, IL-12 能促進 CD4+ Th1 型免疫反應的進展,。 作為感染應答, IL-27 最先分泌,, 促進 TH0 向 THR0/1 過度,,隨后分泌 IL-12, 產生 Th1 效應細胞,。 與 IL-18,、 IL-12 一起產生把效應細胞轉化 Th1 記憶細胞, 接著這些細胞被 IL-23 激活,。
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