本產(chǎn)品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、反應(yīng)緩沖液,濃度為2×,。具有快速簡便,、靈敏度高、特異性強(qiáng),、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),,可最大限度的減少人為誤差。使用時(shí)只需加入DNA模板和引物既可,。
本產(chǎn)品使用方便快捷,,能避免 PCR 操作過程中的污染,使用時(shí)只需取適量
2×Taq PCR Mix溶液,,加入模板和引物,,并加入去離子水補(bǔ)足體積,使 PCR Mix溶液濃度為1×即可進(jìn)行反應(yīng),。使用前請(qǐng)保證充分溶解并混勻,,操作需在冰上進(jìn)行。
本產(chǎn)品有含紅色染料,,使用含染料的產(chǎn)品在 PCR 反應(yīng)完成后,,不需添加上樣緩沖液即可直接 上樣進(jìn)行電泳;也可經(jīng)過純化處理,,以用于酶切,、連接、熒光測序等后續(xù)操作,。
使用方法(用戶需自備的試劑:DNA 模板,、引物。 操作示例:以20 µl PCR反應(yīng)體系為例):
按照下表配制 PCR 反應(yīng)體系
組分 | 體積 |
DNA模板 | 1ul |
正向引物(10um) | 0.4ul |
反向引物(10um) | 0.4ul |
2×Taq PCR Mix | 10ul |
ddH2O | 補(bǔ)足至20ul |
2. PCR 反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置
流程 | 溫度 | 時(shí)間 |
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預(yù)變性 | 94℃ | 2min |
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變性 | 94℃ | 30s | 25-32循環(huán) |
退火 | 55-65℃ | 30s |
延伸 | 72℃ | 60 s/kb |
終延伸 | 72℃ | 5-10min |
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注:模板量:10-1000 ng 基因組 DNA,,1-30 ng 質(zhì)粒,,或 1-2 μl RT-PCR 反應(yīng)后的 cDNA,。 注 : 以上舉例為常規(guī) PCR 反應(yīng)系統(tǒng) , 僅供參考,。實(shí)際反應(yīng)條件因模板,、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異 , 需根據(jù)模板,、 引物,、 目的片段的特點(diǎn)設(shè)定最佳反應(yīng)條件,并根據(jù)比例放大或縮小反應(yīng)體系,。
3. 結(jié)果檢測:取 2 μl 反應(yīng)液電泳觀察結(jié)果,。含染料產(chǎn)品可直接上樣電泳,無染料產(chǎn)品需添加上樣緩沖液后進(jìn)行電泳,。