目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)>>原代細(xì)胞分離>> abs47048001膠原酶Ⅱ;9001-12-1
CAS | 9001-12-1 | 純度 | 活性>125CDU/mg |
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分子量 | - | 分子式 | - |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100mg;1g |
貨號 | abs47048001 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè),石油,能源 |
主要用途 | 通常用作心臟,、骨,、肝、甲狀腺,、唾液腺和軟骨等組織的原代細(xì)胞制備,。 |
產(chǎn)品描述:
膠原酶(Collagenase)是一種蛋白水解酶,,常用來消化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶,,膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列(高頻出現(xiàn)在膠原collagen,,很少在其他蛋白中發(fā)現(xiàn))并切割氨基酸(X)和Gly之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶,,膠原酶是一種可識別并降解具三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維,,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織。
膠原酶來源于溶組織梭菌(Clostridiumhistolyticum),,是一種酶粗提物,,不僅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維,;還含有其他的一些蛋白酶,、多糖酶、脂酶等,,分別用以水解存在結(jié)蹄組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白,、多糖和脂質(zhì)等。目前商業(yè)化的膠原酶因所含組分的差異分為五類,,其在應(yīng)用上具有一定區(qū)分,。
本品是II型膠原酶,,活性≥125CDU/mg凍干物,比I型膠原酶含更高的梭菌蛋白酶活性,,通常用作心臟,、骨、肝,、甲狀腺,、唾液腺和軟骨等組織的原代細(xì)胞制備。
來源:溶組織梭菌
純度:活性>125CDU/mg
使用方法:
一,、儲存液制備:
1,、直接往100mg膠原酶內(nèi)加入100µl含鈣鎂的HBSS緩沖液,輕輕漩渦震蕩確保充分溶解混勻,。
2,、根據(jù)具體批次的酶活力,用含鈣鎂的HBSS緩沖液調(diào)整酶濃度到100U/µl(1000×儲存液),,之后用低蛋白吸附濾膜過濾除菌,。
3、立即使用或?qū)Υ嬉焊鶕?jù)單次用量分裝,,置于-20℃避光保存,。
4、使用前置于冰上融化,,避免反復(fù)凍融,。建議膠原酶的工作濃度范圍50-200U/ml(或0.5-2.5mg/ml),具體使用濃度請根據(jù)具體消化對象或參考文獻(xiàn)來調(diào)整,。
二,、組織分離:
1、用無菌刀或剪刀將組織切成3-4mm小片,,之后用含鈣鎂的HBSS緩沖液清洗組織片幾次,;
2、加足量含鈣鎂的HBSS緩沖液浸沒組織片,,之后按照50-200U/ml用量加入適量膠原酶,;
3、37℃孵育4-18h,,置于水平搖床并且孵育體系加入3mM CaCl2可提高消化效率,。
4、將消化好的細(xì)胞混合物用無菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過篩,。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離,。
5、將過篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍,。
6,、低速離心,,吸掉清洗液。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,,使用自動細(xì)胞計數(shù)器或手動法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測,。
三、器官灌注:
1,、將膠原酶加入37℃預(yù)熱含鈣鎂的HBSS緩沖液,,使其濃度為50-200U/ml,或根據(jù)具體實驗體系調(diào)整,;另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2,、按照針對特定器官的預(yù)優(yōu)化頻率來進(jìn)行灌注,;
3、將收集到的細(xì)胞/組織混合碎片用無菌的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過篩,。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進(jìn)一步解離,。
4、將過篩收集到的細(xì)胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍,。
5,、低速離心,吸掉清洗液,。最后用適當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,,使用自動細(xì)胞計數(shù)器或手動法進(jìn)行活細(xì)胞數(shù)檢測。
儲存方法:
2-8℃干燥保存,,可置于-20℃長期保存,,2年有效。
注意事項:
為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
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