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愛必信（上海）生物科技有限公司

021-38015121

參考價	￥ 280
訂貨量	≥1份

具體成交價以合同協(xié)議為準

￥280

≥1份

具體成交價以合同協(xié)議為準

品牌 absin
型號 abs60371
廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
所在地 上海市

屬性

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更新時間：2025-02-07 07:24:19瀏覽次數(shù)：1953評價

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產(chǎn)品分類品牌分類

分子生物學

核酸提取/純化

qPCR系列

mRNA合成

轉(zhuǎn)染產(chǎn)品

分子克隆

其它分子生物學試劑

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產(chǎn)品簡介

CAS	-	純度	-
分子量	-	分子式	-
供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	100T
貨號	abs60371	應(yīng)用領(lǐng)域	化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合
主要用途	-

SfiI 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒 DNA,、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切,。所有快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切,。

詳細介紹

產(chǎn)品描述

描述

SfiI 快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組的快速限制性內(nèi)切酶,，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切,。所有快速內(nèi)切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優(yōu)良的活性,，能夠在 5~15 分鐘內(nèi)完成酶切。此外,，去磷酸化,、連接試劑在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反應(yīng),，提升“酶切 - 修飾 - 連接"的體驗,。CutOne Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳,。CutOne Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近,。

識別位點：
5'...G G C C N N N N ↓ N G G C C...3'
3'...C C G G N ↑ N N N N C C G G...5'

建議反應(yīng)條件：
1× CutOne™ 緩沖液,；
50℃溫育；
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應(yīng)體系,。

失活條件：
不可熱失活,，請使用酚氯仿抽提或柱純化。

產(chǎn)品組成：

組分	規(guī)格
SfiI	100 μl
10× CutOne Buffer	1 ml
10× CutOne Color Buffer	1 ml

使用方法

使用方法
1,、DNA 快速酶切流程
（1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

組分	質(zhì)粒 DNA	PCR 產(chǎn)物	基因組 DNA
ddH2O	15ul	16ul	30ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	3ula	5ul
底物 DNA	2ul (up to 1ug)	10ul (~0.2ug)	10ul (5ug)
SfiI	1ul	1ul	5ul
Total	20ul	30ul	50ul

a. 本體系適用于經(jīng)過純化的 PCR 產(chǎn)物酶切,。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強度，10× Cutone Buffer 加入量可適當減少至 2 μl,。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性,，會影響酶切產(chǎn)物，因此如下一步需進行（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋）,，然后瞬時離心以收集掛壁液滴,；
（3）50℃溫育 15 min（質(zhì)粒）,，或 15~30 min（PCR 產(chǎn)物），或 30~60 min（基因組 DNA）,；
（4）酚氯仿抽提或柱純化（可選）,；

（5）如果使用 CutOne Color Buffer 進行酶切反應(yīng)，得到的產(chǎn)物可以直接進行上樣電泳,。

2,、雙酶切或多酶切
（1）每種快速內(nèi)切酶的用量為 1 μl，并根據(jù)需要適當擴大反應(yīng)體系,；
（2）所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應(yīng)體系的 1/10,；

（3）如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應(yīng)溫度不同，應(yīng)先以最適溫度低的酶開始酶切,，再添加最適溫度較高的酶,，在其最適反應(yīng)溫度下進行酶切反應(yīng)。

3,、適用于質(zhì)粒的擴大反應(yīng)體系

DNA	1ug	2ug	3ug	4ug	5ug
SfiI	1ul	2ul	3ul	4ul	5ul
10× CutOne Buffer 或 10× CutOne Color Buffer	2ul	2ul	3ul	4ul	5ul
Total	20ul	20ul	30ul	40ul	50ul

不同 DNA 中的酶切位點數(shù)量

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
0	0	0	0	0	1	0	3

甲基化修飾影響

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
無影響	剪切受影響	剪切受影響	無影響	無影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

CutOne Buffer

Thermo Scientific

FastDigest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

儲存/保存方法

-20°C 及以下運輸及保存,，長期保存建議放 80°C 。有效期2年,。

技術(shù)指標

質(zhì)量控制：
功能活性檢測：
50℃下,，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中，1 μl SfiI 能夠在 15 min 內(nèi)消化 1 μg pEPE DNA,。
超長時間溫育檢測：
50℃下,，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中，將 1 μl SfiI 與 1 μg pEPE DNA 共同溫育 3 h,，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,。更長時間酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測：
50℃下,，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物,，回收酶切產(chǎn)物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過 95%的酶切產(chǎn)物重新連接,。將連接產(chǎn)物再次回收后,，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開 95% 以上的連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測：
50℃下,，在 20 μl 通用 CutOne 反應(yīng)體系中將 1 μl SfiI 與 1 μg 超螺旋質(zhì)粒 DNA 共同溫育 4 h 后,，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于 10% 的質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)變成缺刻或線性狀態(tài),。

溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,，不支持臨床等研究

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