在分子生物學(xué)研究中,，RNA提取是非常重要的基礎(chǔ)步驟，而提取效率和純度直接影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功,。Trizol試劑是一款高效,、可靠的核酸提取試劑，為科研人員提供專業(yè)解決方案。
Trizol產(chǎn)品特點(diǎn)：
1,、高效提取RNA
Trizol試劑基于經(jīng)典的酸性酚-氯仿分離法,，可從細(xì)胞、組織,、植物等多種樣本中快速提取高純度的RNA,。可滿足多種實(shí)驗(yàn)需求,，省時(shí)高效,。
2、高純度
提取的RNA具有較高的純度和完整性,，A260/280值通常在1.8-2.0,，wan全滿足分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的要求。
3,、適用范圍廣
樣本類型：適用于細(xì)胞,、組織、細(xì)菌,、酵母和病毒等多種樣本,。
下游實(shí)驗(yàn)：提取的核酸可直用于Northern，點(diǎn)雜交,，純化mRNA,，體外翻譯,，RNase protectionassay,，cDNA克隆,，以及RT-PCR,；也可以用于基因表達(dá)芯片分析、高通量測(cè)序等對(duì)RNA質(zhì)量要求較高的實(shí)驗(yàn),，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,。
需要的試劑
試劑名稱 | 應(yīng)用 |
Trizol試劑(abs60154) | 裂解樣本 |
氯仿 | 離心后分離出上層水相(含RNA) |
異丙醇 | 沉淀RNA |
75%乙醇 | 洗滌沉淀的RNA |
DEPC-ddH2O(abs9259) | 溶解RNA |
需要的耗材
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs7119 | 1.5mL離心管(無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7118 | 0.5mL離心管(無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7071 | 10uL濾芯吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7074 | 200uL濾芯吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7077 | 1000uL濾芯吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7176 | 20uL濾芯吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7072 | 10uL吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7073 | 10uL吸頭(袋裝,無(wú)酶) | 1箱 |
abs7075 | 200uL吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7076 | 200uL吸頭(袋裝,無(wú)酶) | 1箱 |
abs7078 | 1000uL加長(zhǎng)吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7079 | 1000uL吸頭(盒裝,無(wú)菌無(wú)酶) | 1箱 |
abs7080 | 1000uL吸頭(袋裝,無(wú)酶) | 1箱 |
abs7081 | 1000uL加長(zhǎng)吸頭(袋裝,無(wú)酶) | 1箱 |
操作步驟：
1、細(xì)胞裂解
★ 組織樣本
Trizol用量：每50-100mg組織加1mL Trizol,，樣品體積不應(yīng)超過(guò)Trizol體積的10％,。
（1）將動(dòng)物或植物組織切成小塊，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理,；
（2）將研磨好的組織粉末快速轉(zhuǎn)入裝有1mL Trizol的2mL離心管中,，在渦旋振蕩器上迅速振蕩混勻,，置于冰上,， 待所有的樣品研磨完,；
（3）裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體,。對(duì)于富含蛋白,、脂肪或多糖物質(zhì)的組織樣品如肌肉,、脂肪組織和植物結(jié)節(jié)部位等,，勻漿后仍會(huì)存留有不溶物質(zhì),，可于4℃ 12,000xg離心10min，然后吸取上清至一新的離心管中,。
★ 細(xì)胞樣本
（1）貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液,，每10cm2培養(yǎng)面積（6孔板單孔或35mm平皿）加入1mL Trizol,，用加樣器吹打數(shù)次,，以確保細(xì)胞wan全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中,；
注：Trizol的使用量應(yīng)由培養(yǎng)皿表面 積決定,，而非由細(xì)胞數(shù)目決定,。Trizol量不足可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
（2）懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，吸盡液體,，每5-10×106動(dòng)植物或酵母細(xì)胞,，或每1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1mL Trizol， 用加樣器吹打,，使其wan全裂解,，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。
注：添加Trizol前切勿洗滌細(xì)胞 ,，以免RNA降解,。必要時(shí)可以用勻漿器來(lái)裂解某些細(xì)菌或者酵母細(xì)胞。
2,、液相分離
（1）裂解產(chǎn)物于室溫放置5min,，使核酸-蛋白復(fù)合物wan全分離（注：此時(shí)樣品可在-80℃長(zhǎng)期保存）；
（2）每1mL Trizol加入0.2mL氯仿,，蓋緊管蓋,，劇烈振蕩15s，室溫放置2-3min,；
（3）4℃ 12,000xg離心15min,，樣品會(huì)分成三層：桔黃色的下層有機(jī)相，中間層和無(wú)色的上層水相,；
（4）吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中,，吸取水相的體積為所用Trizol試劑的60％。
3,、RNA回收
（1）按照每1mL Trizol的最初使用量加入0.5mL異丙醇,，顛倒數(shù)次混勻，室溫放置10min,；
（2）4℃ 12,000xg離心10min,，棄除上清，可見(jiàn)膠狀的RNA沉淀,；
（3）按照每1mL Trizol的最初使用量加入1mL 75%乙醇,，顛倒數(shù)次混勻，洗滌沉淀,；
（4）4℃ 12,000xg離心5min,，棄除上清；
（5）室溫倒置5-10min晾干或真空抽干（不要使用真空干燥離心機(jī),，以免RNA過(guò)干,，難以溶解）；
（6）加入適量（如25uL） DEPC-ddH2O或TE緩沖液,，用加樣器吹打數(shù)次溶解RNA,；
（7）通過(guò)RNA電泳以及紫外分光光度計(jì)檢測(cè),，確定RNA的濃度,、純度和完整性,；
（8）所得的RNA應(yīng)立即使用或適量分裝后-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。
僅需幾步操作,，即可得到高質(zhì)量的RNA,，簡(jiǎn)便且高效,。除Trizol(abs60154)外,，Absin還有Trizol（總RNA抽提試劑盒）(abs9331)包含有RNA提取全流程的試劑,。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs60154 | Trizol | 500mL |
abs9331 | Trizol(總RNA抽提試劑盒) | 1kit |
abs9259 | 無(wú)酶無(wú)菌水 | 500mL |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC,、IHC,、凋亡,、ELISA、ChIP,、Co-IP,、TR-FRET,、生化檢測(cè),、殘留檢測(cè),、多因子檢測(cè)),；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝；輔助試劑,、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE,、B27,、N2、霍亂毒素B亞單位CTB,、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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