小鼠脾臟是一個(gè)重要的免疫器官,，位于小鼠左側(cè)腹腔中，靠近胃的左側(cè),，呈長橢圓形狀,。大小會(huì)根據(jù)小鼠的品種和健康狀況有所不同，一般來說,，成年小鼠的脾臟長度大約在1.5厘米到2.5厘米之間,。脾臟的顏色和質(zhì)地可能會(huì)因?yàn)樾∈蟮钠贩N和健康狀況而有所變化，通常呈現(xiàn)出類似葉片的形態(tài),，顏色暗紅,。在實(shí)驗(yàn)研究中，小鼠脾臟細(xì)胞的分離,、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)是免疫學(xué)研究的重要方法,，也是流式細(xì)胞術(shù)分析的前提。
一,、耗材與試劑
表1 小鼠脾臟解離部分試劑耗材參考表
材料 | 試劑 | 設(shè)備 |
15/50mL離心管 | 1xPBS緩沖液 | 水平恒溫?fù)u床 |
10cm培養(yǎng)皿 | RPMI 1640培養(yǎng)基 | 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 |
眼科手術(shù)剪,、眼用鑷 | 75%酒精 | 電動(dòng)移液器、1mL槍頭 |
100μm細(xì)胞篩網(wǎng) | FBS | 高速離心機(jī) |
10mL移液管 | HBSS平衡液溶液 | 渦旋儀 |
5mL流式管 | Absin組織解離試劑盒 | 4℃冰箱 |
| 細(xì)胞染色緩沖液 | 流式細(xì)胞儀 |
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 用途 |
abs50097 | 小鼠脾臟組織解離試劑盒 | 10T/25T | 解離組織 |
abs7303 | 5mL流式管(無菌無酶,帶蓋) | 500個(gè)/箱 | 流式管 |
abs9484 | RPMI1640培養(yǎng)基 | 500mL | 保存細(xì)胞活性 |
abs7232 | 70um細(xì)胞篩網(wǎng) | 100個(gè)/箱 | 耗材 |
abs7102 | 15mL離心管(尖底) | 100支/袋 | 耗材 |
abs7100 | 50mL離心管(尖底) | 40支/袋 | 耗材 |
abs962 | PBS緩沖液(1x) | 500mL | 試劑 |
abs9475 | 細(xì)胞染色緩沖液 | 500mL | 試劑 |
abs9101 | 紅細(xì)胞裂解液(1x) | 100mL/500mL | 裂紅液 |
二,、實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：將脾臟小鼠脾臟組織解離試劑盒至于37度水浴鍋中預(yù)熱（脾臟組織解離試劑收到后,，推薦分裝凍存），如果使用紅細(xì)胞裂解液為10×,，需提前用超純水稀釋成1×,。PBS提前預(yù)冷。
1,、將小鼠頸部脫臼處死,，75%酒精消毒小鼠表面，至于托盤中,，左側(cè)腹部朝上,，鑷子輔助操作，提起左腹側(cè)中部皮膚，剪開皮膚,，肉眼可見暗紅色,，長條狀脾臟，剪開腹膜,，鑷子提起脾臟,，見到分離，盡可能的除去結(jié)締組織和脂肪,，PBS沖洗,，取新鮮小鼠脾臟組織100mg-200mg左右（一個(gè)20g的小鼠，脾臟重量可能在100mg左右,，具體以實(shí)際情況為準(zhǔn)）加至50mL無菌離心管中,，用眼科剪將組織che底剪碎至1-2mm3，加入小鼠脾臟組織解離試劑1mL,；
2,、將離心管置于恒溫?fù)u床上，37℃/180rpm震蕩孵育30min左右,，消化小鼠脾臟組織,，可根據(jù)組織狀態(tài)適當(dāng)調(diào)整消化時(shí)間（脾臟相對(duì)比較好消化），混懸液中肉眼無明顯組織塊時(shí),，取少量懸液倒置顯微鏡下觀察,，可輔助判斷，有大量活細(xì)胞即可停止消化（中心明亮）,，也可用臺(tái)盼藍(lán)染色或者其他方式,；
紅色圈內(nèi)：死細(xì)胞 綠色圈內(nèi)：活細(xì)胞
3、孵育結(jié)束后將離心管內(nèi)的組織勻漿用70um無菌過濾器過濾,，然后加入細(xì)胞培養(yǎng)基沖洗無菌過濾器,，用50mL的離心管收集濾液；
4,、將收集的濾液1200rpm離心5min ,，棄上清；
5,、可使用紅細(xì)胞裂解液去除組織解離過程中的紅細(xì)胞,，具體操作為，向第4步所得的沉淀加入3mL 1×紅細(xì)胞裂解液,，重懸沉淀,，渦旋混勻，室溫下避光孵育3-5min,，加入2mL預(yù)冷的PBS, 1200rpm離心 5min,，棄上清,。重復(fù)洗滌一次；
6,、棄上清,，細(xì)胞染色緩沖液重懸細(xì)胞沉淀，并調(diào)整細(xì)胞濃度至5-10×106個(gè)細(xì)胞/mL,，將100uL/管的細(xì)胞懸液分配到12×75mm的流式管中,，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
1,、細(xì)胞得率低
一般情況下,，成年C57BL/6小鼠一個(gè)脾臟可解離出大約10×108–1.4×108個(gè)細(xì)胞,，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞得率特別低，需要注意,，樣本獲取階段要盡可能完quan去除組織周圍的脂肪,，盡可能將組織剪碎，從而提高細(xì)胞產(chǎn)量,。在涉及的清洗步驟中,，倒出上清液前，先用移液槍吸棄上層脂肪（可將槍頭jian端修剪一下,，避免吸氣時(shí)堵塞）
2,、細(xì)胞活率低，死細(xì)胞/碎片多
首先,，解離試劑孵育的時(shí)間不能過長,，長時(shí)間孵育會(huì)造成細(xì)胞活力降低及表面標(biāo)記物丟失，死細(xì)胞過多,，釋放DNA絲纏繞,，導(dǎo)致溶液粘稠，其次,，千萬不要縮短清洗的步驟,，清洗可以幫助去除粘連體、碎片和死細(xì)胞,，紅細(xì)胞裂解液的孵育時(shí)間也不能過長,，一般5min即可，如果細(xì)胞活力還是很低,，建議檢查紅細(xì)胞裂解液是否新鮮有效,。
3、紅細(xì)胞裂解不wan全
表現(xiàn)為洗滌步驟后出現(xiàn)明顯的紅色沉淀,。確保制備新鮮的紅細(xì)胞裂解緩沖液,，在室溫下進(jìn)行裂解,。裂解開始前，要確保細(xì)胞已wan全重懸,，裂解時(shí)間不能過短,。
四、解離效果
該試劑盒講小鼠Spleen組織處理為單細(xì)胞懸液后做流式：細(xì)胞活力,、CD45,、CD3、CD4,、CD8染色結(jié)果
注：本產(chǎn)品僅作科研實(shí)驗(yàn)使用,，不支持臨床等研究
五、其他產(chǎn)品推薦
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9907 | 流式絕對(duì)計(jì)數(shù)管 | 50T |
abs9477 | 小鼠Fc受體阻斷劑 | 200T/500T |
abs9476 | 人Fc受體阻斷劑 | 50T/200T |
abs9488 | 鞘液 | 20L |
abs9107 | 佛波酯 | 1mg/5mg/25mg |
abs9108 | 離子霉素鈣鹽 | 1mg/5mg |
abs970 | D-PBS緩沖液(1×,無鈣鎂) | 500mL |
abs810012 | Brefeldin A | 10mg/25mg/50mg |
abs812975 | Monensin sodium salt | 25mg/100mg |
abs9475 | 細(xì)胞染色緩沖液 | 500mL |
abs9110 | 固定劑 | 50mL |
abs9111 | 破膜劑 | 150mL |
abs7303 | 5mL流式管(無菌無酶,帶蓋) | 1箱 |
abs1840002 | APC Mouse anti-Human CD3 Antibody(3JI3-9) | 25T/100T |
abs182427 | PE Mouse anti-Human CD4 Antibody(5D4) | 25T/100T |
abs182430 | FITC Mouse anti-Human CD8 Antibody(3C4) | 25T/100T |
abs180046 | PE-Cy7 Mouse anti-Human CD25 Antibody(BC96) | 25T/100T |
abs1840696 | FITC Mouse anti-Human CD80 Antibody(2D10.4) | 25T/100T |
abs182338 | APC Rat anti-Mouse CD25 Antibody(4APC61.5) | 25T/100T |
More...... | ||
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC,、IHC,、凋亡、ELISA,、ChIP,、Co-IP、TR-FRET,、生化檢測,、殘留檢測、多因子檢測),；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝；輔助試劑,、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27,、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
9
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)