1,、什么是蛋白marker？
蛋白Marker,，也稱為蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（Protein Molecular Weight Marker）,，是用于蛋白質(zhì)電泳分析中的一系列已知分子量的蛋白質(zhì)混合物。它們通常包含多個不同分子量的蛋白質(zhì)條帶,，這些條帶在電泳過程中會根據(jù)分子量的大小和電荷差異遷移不同的距離,，從而在凝膠上形成一系列有序的條帶。
2,、Marker在WB中的作用,？
分子量標(biāo)定：Marker包含一系列已知分子量的蛋白質(zhì)，通過與Marker上的帶狀蛋白質(zhì)帶進行比較,，可以精確地確定待測蛋白的分子量,；
驗證電泳和轉(zhuǎn)印效果：Marker在電泳和轉(zhuǎn)印的過程中移動到膜上，可以幫助研究者驗證這些步驟的效果,。通過檢查Marker的帶狀分布,，可以確保電泳和轉(zhuǎn)印過程中沒有發(fā)生異常；
確定蛋白質(zhì)遷移距離：通過測量Marker的遷移距離,，可以估算待測蛋白質(zhì)的遷移距離,。這對于進一步的數(shù)據(jù)分析和結(jié)果解釋非常重要；
標(biāo)定凝膠濃度：Marker還可以用于幫助研究者選擇適當(dāng)?shù)哪z濃度。不同分子量的Marker在不同的凝膠濃度下會產(chǎn)生不同的遷移模式,，因此可以根據(jù)Marker的遷移特性選擇合適的凝膠濃度,。
3、Marker有哪些分類,，各有什么特點,？
● 天然蛋白Marker：
這類Marker是從自然來源提取的蛋白質(zhì)，它們經(jīng)歷了天然的修飾過程,，如裂解、二硫鍵形成,、糖基化或磷酸化,，并保持其復(fù)雜的3D結(jié)構(gòu)。天然蛋白Marker更接近其在體內(nèi)的自然狀態(tài),，這使得它們在藥物開發(fā)和生物醫(yī)學(xué)研究中非常有用,。天然蛋白Marker可以提供更準(zhǔn)確的分子量估計，因為它們未經(jīng)過重組或合成,，保持了蛋白質(zhì)的自然特性,。abs9919非變性蛋白Marker (66-669kDa)，經(jīng)過非變性電泳后,，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到分布均勻,、密度相近的4條帶，不適用于SDS-Page,，因為在SDS存在下,，含有多個亞單位的蛋白會不同程度解聚。
abs9919非變性蛋白Marker(66-669kDa)
● 變性Marker：
這類Marker在生產(chǎn)過程中經(jīng)過了變性處理,，通常是通過加熱和化學(xué)物質(zhì)（如SDS）的處理,，以確保蛋白質(zhì)wan全展開成線性結(jié)構(gòu)。變性Marker的優(yōu)點在于它們提供了一致的蛋白質(zhì)遷移特性,，這對于精確的分子量估計和實驗重復(fù)性非常重要,。由于變性處理，這類Marker的蛋白質(zhì)保持一致的電荷和形狀,，使得它們在電泳過程中的遷移更加可預(yù)測,。
變性蛋白Marker一般可分為預(yù)染和非預(yù)染兩種
● 未預(yù)染蛋白Marker：
這類Marker包括寬分子量、高分子量和低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn),。它們是較簡單,、較準(zhǔn)確的一種，因為不附帶染料分子或標(biāo)記分子,，所以所示大小正好是蛋白原本的大小,。缺點是在電泳過程中不可見，需要在電泳結(jié)束后經(jīng)過染色才能看到，無法實時監(jiān)控電泳過程,。適合精確判斷蛋白大小,，但操作相對麻煩，需要額外的染色步驟,。如abs9840非預(yù)染蛋白Marker (14.4-97.4kDa),，用考馬斯亮藍(lán)R-250染色可得分布均勻密度相同的六個條帶，產(chǎn)品含SDS, 不適合用于非變性膠,。
abs9840非預(yù)染蛋白Marker(14.4-97.4kDa)
● 預(yù)染蛋白Marker：
這類Marker在生產(chǎn)時就結(jié)合了染料,，因此在電泳過程中或轉(zhuǎn)膜時可以直接觀察到不同顏色的條帶。預(yù)染蛋白Marker方便實驗人員在電泳時,、電泳后,，以及轉(zhuǎn)膜后監(jiān)測電泳情況和估計遷移率。又分為單色預(yù)染和多色預(yù)染,。單色預(yù)染Marker通常會利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小,，而多色預(yù)染Marker用不同的顏色來區(qū)別，更易于辨認(rèn) ,。需要注意的是,，預(yù)染蛋白Marker與染料共價耦聯(lián)，所以在不同的緩沖條件下電泳時遷移特性可能會發(fā)生某些變化,，可能導(dǎo)致一些偏差,，因此不太適合精確定位蛋白。
abs923預(yù)染蛋白Marker(10-245kDa)
● 預(yù)染發(fā)光Western Marker：
傳統(tǒng)的Western Blot試驗需要使用預(yù)染蛋白Marker來跟蹤檢測陽性抗原信號和轉(zhuǎn)膜效率,，但預(yù)染蛋白Marker無法在膠片上曝光,，曝光信號需要根據(jù)膜上的預(yù)染蛋白Marker來判斷。absin新品abs90004 預(yù)染發(fā)光Western Marker由9種發(fā)光蛋白和9種預(yù)染蛋白組成,；9中發(fā)光蛋白分別為23,、30、36,、44,、50、62,、90,、120和160KDa，這些蛋白均可與抗體結(jié)合,，因此能與抗原在同一張膜上曝出信號,，陽性信號可以直接通過Western Marker的位置來判斷；9種預(yù)染蛋白分別為15,、25,、35,、40、55,、70,、100、130和180KDa,，其中70KDa為紅色,，其他為藍(lán)色，轉(zhuǎn)膜完畢后在膜上肉眼可見,。
1）可與抗原同時檢測信號,，使Western blot結(jié)果判斷更加簡便；
2）發(fā)光marker沒有偶聯(lián)和標(biāo)記其他分子,，分子量更加準(zhǔn)確,；
3）綜合發(fā)光marker和預(yù)染marker的優(yōu)勢，既能監(jiān)測轉(zhuǎn)膜又能與抗原同時檢測,。
HRP標(biāo)記的Goat anti mouse IgG二抗(一抗：mouse anti P38)ECL化學(xué)發(fā)光檢測
多重?zé)晒鈾z測
按照分子量又可以將marker分為高分子量、低分子量,、寬分子量等,。高分子量蛋白Marker是指那些用于檢測大分子量蛋白質(zhì)的標(biāo)記，通常包含的蛋白質(zhì)分子量范圍較高,，它們提供的分子量范圍通常從幾十kDa到幾百kDa不等,。低分子量蛋白Marker是指用于檢測小分子量蛋白質(zhì)的標(biāo)記，通常包含的蛋白質(zhì)分子量范圍較低,，從幾kDa到幾十kDa的分子量范圍,。寬分子量蛋白Marker是指覆蓋寬廣分子量范圍的標(biāo)記，通常包含從低到高多個分子量的蛋白質(zhì),。
4,、如何選擇marker？需要考慮什么因素,？
首先看實驗類型,，非變性蛋白需要非變性蛋白marker，變性蛋白則需要變性marker,，兩者不可以相互替換,，然后看目的蛋白大小，選擇相應(yīng)的marker,，在可選條件下,，寬分子量蛋白marker，是不錯的選擇,，另外看實驗要求,，如果需要在電泳和轉(zhuǎn)印過程中檢測,，需要選擇預(yù)染marker，如果需要精確的條帶分子量大小,，則需要非預(yù)染marker做參考,，可以同時使用預(yù)染marker和非預(yù)染marker，除了以上因素,，還需要考慮marker的使用體系,，absin常見marker信息如下：
類型 | 非變性蛋白marker | 非預(yù)染蛋白 Marker | 藍(lán)色預(yù)染蛋白 Marker | 多色預(yù)染蛋白Marker | 預(yù)染發(fā)光Western Marker | |||
貨號 | abs9919 | abs9840 | abs9511 | abs9859 | abs922 | abs923 | abs924 | abs90004 |
分離量范圍 | 66-669kDa | 14.4-97.4kDa | 3.3-31kDa | 14.4-97.4kDa | 10-180kDa | 10-245kDa(Tris-glycine-SDS) | 10-180kDa | 發(fā)光蛋白：23-160kDa 預(yù)染蛋白：15-180kDa |
條帶數(shù)量 | 4 | 6 | 5 | 6 | 10(10和17可能因為膠濃度原因跑不開) | 12 | 10(10和17可能因為膠濃度原因跑不開) | 9 |
條帶分子量 | 66、238,、440,、669 | 14.4、22,、31,、43、66.2,、97.4 | 3.3,、6.5、14.4,、20.1,、31 | 14.4、20.1,、31,、43、66.2,、97.4 | 10, 17, 25, 33, 43, 55,，75, 95, 130,180 | 11、17,、20,、25、35,、48,、63、75,、100,、135、180,、135,、180、245（Tris-glycine-SDS） | 10, 17, 25, 33, 43, 55,，75, 95, 130,180 | 發(fā)光蛋白： 23,、30,、36、44,、50,、62、90,、120 ,、 160 預(yù)染蛋白： 15、25,、35,、40、55,、70,、100、130 ,、 180 |
顏色 | 單色 | 單色 | 藍(lán)色 | 藍(lán)色 | 75紅色,，25k綠色，其余藍(lán)色 | 25綠色,，75橙紅色,，其余藍(lán)色 | 72橙色，10綠色,，其余藍(lán)色，10k條帶在15%以下膠濃度時深綠色 | 預(yù)染蛋白70KDa為紅色,，其他為藍(lán)色,， |
推薦凝膠體系 | 非變性電泳 | 變性電泳 | Tricine SDS-PAGE | Tris-Glycine，Bis-Tris,，Tris-Acetate,，藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量無變化，橙色條帶和進口一致 | Tris-Glycine,，Bis-Tris,，Tris-Acetate，藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量無變化,，橙色條帶和進口一致 | Tris-Glycine | Tris-Glycine,，Bis-Tris，Tris-Acetate,，藍(lán)色和綠色條帶表觀分子量無變化,，橙色條帶和進口一致 | Tris-Glycine，Bis-Tris等 |
處理 | 需要考馬斯亮藍(lán)染色,，不能加熱 | 需要考馬斯亮藍(lán)染色及上樣前沸水浴 | 無需染色,，勿加熱 | 無需染色,、無需加熱 | 無需染色、直接使用,，不要煮沸,、稀釋和加入還原劑處理 | 無需染色、無需加熱 | 無需染色,、直接使用,，不要煮沸、稀釋和加入還原劑處理 | 無需染色,、直接使用,，不要煮沸 |
非變性蛋白電泳好物推薦
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL |
abs9360 | Tris-Glycine電泳緩沖液(10×) | 500mL |
abs9618 | Glass gel預(yù)制膠 Tris-Gly 15%, 10wells, 1.5mm | 10片/盒 |
abs9954 | 非變性非還原性蛋白上樣緩沖液(5×) | 1mL×5 |
abs9919 | 非變性蛋白 Marker(66-669kDa) | 200uL |
abs964 | 考馬斯亮藍(lán)染色試劑盒(常規(guī)型) | 1kit |
WB好物推薦
| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
樣本處理 | abs9346 | 細(xì)胞漿、細(xì)胞核及細(xì)胞膜蛋白抽提試劑盒 | 50T |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100mL | |
abs9162 | 廣譜型磷酸酶抑制劑混合物(100×儲液) | 1mL | |
abs9161 | 廣譜型蛋白酶抑制劑混合物(不含EDTA,100×DMSO儲液) | 1mL | |
蛋白定量 | abs9232 | BCA蛋白定量試劑盒 | 500T |
膠 | 配膠試劑盒,各類預(yù)制膠(參考前面表格) | ||
上樣與電泳 | abs953 | 上樣緩沖液(2×) | 10mL |
abs951 | 電泳液(10×) | 100mL | |
abs923 | 預(yù)染蛋白Marker(10-245kDa) | 500uL | |
轉(zhuǎn)膜 | abs932 | PVDF膜(0.45μm) | 20張 |
abs960 | NC膜(0.45μm) | 20張 | |
abs950 | 電轉(zhuǎn)液(10×) | 100mL | |
封閉 | abs9175 | 脫脂奶粉 | 500g |
abs9157 | 牛血清白蛋白 | 100g | |
抗體稀釋與去除 | abs954 | WB專用一抗二抗稀釋液 | 100mL |
abs967 | Western一抗二抗去除液(強堿性) | 500mL | |
顯色與檢測 | abs920 | ECL化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒 | 25mL×2 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC,、IHC,、凋亡、ELISA,、ChIP,、Co-IP、TR-FRET,、生化檢測,、殘留檢測、多因子檢測),；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒,；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒),；化合物大包裝；輔助試劑,、耗材/儀器,、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27,、N2,、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE,、百日咳毒素PTX,、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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