科研狗起早摸黑做了幾天分子克隆實驗,，
本想著拖了好幾個星期的實驗終于要做完啦！瞬間覺得自己棒棒噠,！
但是最后看實驗結果?。?！ 原地裂開
排查實驗試劑,，沒問題！
排查實驗操作,，沒問題,！
排查儀器，沒問題,！
那么問題到底出在哪呢,？
其實問題有可能出現(xiàn)在樣本保存與前處理步驟中哦。生物樣本中的核酸(DNA/RNA)會因為核酸酶,、溫度,、pH值,、微生物、自身化學性質等因素而發(fā)生被動或主動降解,，從而導致分子實驗結果不盡人意,。目前針對不同科研的需求，更多的樣本保存方式也相繼問世,，小愛為大家匯總了各類樣本保存的步驟,、注意事項、以及樣本保存耗材或保存液的推薦,。
一,、實驗樣本主要類型：
分子實驗中主要的樣本類型有：純核酸類、組織類,、細胞類及環(huán)境類,。不同樣本具有不同的保存方式以及操作注意事項。
圖1 常見的實驗樣本類型
表1 不同類型樣本核酸保存方法及穩(wěn)定性
類型 | 檢測目標 | 穩(wěn)定性及保存注意事項 |
組織 | DNA/RNA | 新鮮組織應盡快加入到含有核酸保護劑的管中,，放置于冰上運輸至實驗室,；石蠟包埋組織中的核酸在室溫即可保持穩(wěn)定。 |
血液 | 全血的DNA/RNA | DNA：全血室溫可穩(wěn)定保存24h,，2-8℃穩(wěn)定保存72h,，-20℃可長期保存 RNA：室溫不建議保存，樣本應至于含有核酸穩(wěn)定劑的管中,，放置于冰上運輸至實驗室,。 |
血清/血漿的cfDNA/ctDNA/病毒DNA/病毒RNA | cfDNA：2-8℃，8h內分離血漿,，-20℃或更低溫度穩(wěn)定保存,； ctDNA：抽血后4-5h內即需要完成核酸提取,； 病毒DNA：2-8℃穩(wěn)定一周,，-20℃穩(wěn)定一年以上； 病毒RNA：2-8℃,，6h內分離血漿，-20℃或更低溫度保存 | |
干血片的DNA | 室溫穩(wěn)定保存19個月,，需要注意防潮,。 | |
細胞 | DNA/RNA | 37℃保持細胞活力即可。 |
骨髓 | RNA | 必須在采集后立即至于RNA穩(wěn)定劑中,，或者于液氮中速凍 |
胸水,、腦水、腦脊液等其他生物體液樣本 | DNA | 低溫（2-8℃）保存,，盡快提取檢測,。 |
二,、實驗樣本前處理步驟及注意事項
1、組織樣本：
塊狀組織樣本短時間內無法充分裂解,，一般需要進行樣本預處理,。組織取材在組織離體30min內完成，取樣的動作要盡量快速利索,，將組織按任一方向切成黃豆粒大小,。
組織DNA提取：新鮮組織樣本用生理鹽水清洗2次,，即刻進行實驗,。如若不立即進行實驗，可用液氮速凍,，-80℃凍存,。
組織RNA提取：將動物或植物組織切成小塊,，在液氮中磨碎或用勻漿器勻漿處理,快速轉入裝有1mL Trizol(abs60154)的2mL離心管中,，立即進行實驗。若后期再進行實驗,，盡量保存時將樣本浸入RNA樣品保存液(abs9268)后置4℃冰箱過夜（4℃過夜是必需的,，這樣可使RNA樣品保存液滲入到組織中），然后轉移到-20℃冰箱,?；蛘咭旱心ソM織，加入Trizol,，放入-80℃保存,。
圖2 組織樣本RNA提取流程圖
2、細胞樣本：
DNA提?。?/strong>細胞收集沉淀后,，進行液氮速凍，-80℃保存,。
RNA提?。?/strong>
1）貼壁細胞：吸盡培養(yǎng)液，每10cm2培養(yǎng)面積加入1mL Trizol,，用加樣器吹打數(shù)次,，以確保細胞裂解，然后轉移至離心管中,。注：貼壁細胞Trizol的使用量應由培養(yǎng)皿表面積決定,，而非由細胞數(shù)目決定。Trizol量不足可能導致提取的RNA中有DNA污染；
2）懸浮細胞：離心收集細胞,，吸盡液體,，每5-10×106動植物或酵母細胞，或每1×107細菌細胞加入1mL Trizol,，用加樣器吹打,，使其裂解，然后轉移至離心管中,。 注：添加Trizol前切勿洗滌細胞,，以免RNA降解。必要時可以用勻漿器來裂解某些細菌或者酵母細胞,。若后期再進行RNA提取實驗,，細胞用液氮速凍，-80℃凍存,。
3,、血液樣本：
采用含有抗凝劑的真空采血管保存即可。但采血管中的抗凝劑種類多樣,，抗凝劑的種類也會直接影響后續(xù)檢測結果,，面對這么多的采血管如何進行選擇？我們建議使用EDTA或枸櫞酸鈉抗凝管,，不建議使用肝素抗凝管（因肝素在后面的核酸提取過程中很難去除,，且肝素對PCR反應有很強的抑制作用，因此不建議使用肝素抗凝管）,。采集完血液,，顛倒混勻備用。另外冰凍血液溶解過程中會有破碎的細胞釋放RNA酶,，因此在冰凍前加入Trizol,，切勿直接凍存新鮮血液，保存好的血液應避免反復凍融,。
4,、血清/血漿樣本：
全血不加抗凝劑分離的上清是血清，加入抗凝劑分離的上清是血漿,。取全血后,，靜止1-2h，置于離心機3000rpm離心15min即可獲得血清或血漿,。
三,、樣本前處理利器—RNA樣品保存液(abs9268)
RNA樣品保存液是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液，能使細胞內的RNA與RNA酶分離,，防止樣本中RNA表達譜發(fā)生變化。加入樣本保存液的樣本中RNA在室溫可以保存7天，4℃可以保存4周,，-20℃,、-80℃標本可以長期保存。在RNA樣品保存液中保存的標本,，反復凍融至室溫20次不影響RNA的質量,。
操作步驟：
1）計算保存液用量：根據(jù)要保存的各樣本的體積，計算出所需RNA樣品保存液用量,；a：RNA樣品保存液的用量應當是組織體積的10倍(100mg組織約用1mL RNA樣品保存液),；b：離心收集2×107細胞RNA樣品保存液的用量是1mL；
2）分裝：將RNA樣品保存液按需要量分裝入自備保存管中,；
3）切片：快速將較大的組織切成厚度＜0.5cm的任意片狀,，較小的組織直接取下，立即浸入RNA樣品保存液中,；
4）保存：保存時先將樣本浸入RNA樣品保存液后置4℃冰箱過夜,，然后轉移到-20℃冰箱或繼續(xù)轉移至-80℃冰箱。
四,、本期小愛產(chǎn)品推薦
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
abs9268 | RNA樣品保存液 | 100mL |
abs9474 | 組織保存液 | 100mL |
abs60150 | RNA酶抑制劑 | 2000U |
abs60154 | Trizol | 100mL |
abs9259 | 無酶無菌水(DEPC水) | 500mL |
Absin特色產(chǎn)品線：
WB相關：ECL發(fā)光液,、預染marker、預制膠,；IHC相關：二抗試劑盒,、組化筆；IP/CoIP試劑盒,；激動劑/抑制劑,；血清、BSA,、蛋白酶K,、CTB、TTX,、CEE,；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒,；ELISA試劑盒,；重組蛋白；抗體: 二抗,、標簽抗體,、對照抗體；定制服務(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
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