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近期很多老師發(fā)圖咨詢細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)背景的“顆粒"是不是污染，如何去除,？今天這篇文章小編帶大家全面解析細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)的“顆粒"問(wèn)題,。細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的“顆粒"可分為胞內(nèi)和胞外兩種，下面兩張圖可以直觀地向大家展示：

很多老師因?yàn)椴磺宄@些“顆粒"的來(lái)源,，害怕污染而將細(xì)胞丟棄,，不僅浪費(fèi)心力,，還耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)度,，接下來(lái)我們逐步分析這些“顆粒"產(chǎn)生的原因,。

1,、細(xì)菌或真菌污染

圖3  污染的細(xì)胞

真菌污染相對(duì)來(lái)說(shuō)比較好鑒別,，一般肉眼可見(jiàn)培養(yǎng)基上層漂浮的霉斑或顯微鏡下可見(jiàn)菌體,，細(xì)菌的菌體相對(duì)較小,，顯微鏡下呈棒狀、球狀或者桿狀,，由于細(xì)菌增值產(chǎn)生酸性物質(zhì)，短期內(nèi)培養(yǎng)基變黃,，渾濁,，細(xì)沙狀沉淀,。

2、細(xì)胞碎片

圖4 細(xì)胞碎片和細(xì)菌區(qū)別

消化不當(dāng)或者PH,、滲透壓,、溫度的變動(dòng)可能引起細(xì)胞死亡，產(chǎn)生碎片,，如何對(duì)細(xì)菌和細(xì)胞碎片辨別,？有困難的老師，可以登錄愛(ài)必信-產(chǎn)品資訊處或者關(guān)注愛(ài)必信公眾號(hào)查看往期文章,。

3,、凋亡小體

圖5 程序性死亡未釋放和正在釋放的凋亡小體

程序性死亡細(xì)胞的核DNA在核小體連接處斷裂成核小體片段，形成濃縮的染色質(zhì)塊,。隨著染色質(zhì)不斷聚集,，核膜在核孔處斷裂，形成核碎片,。同時(shí)由于不斷脫水,，細(xì)胞質(zhì)不斷濃縮，細(xì)胞體積減小,。整個(gè)細(xì)胞通過(guò)發(fā)芽,、起泡等方式形成一個(gè)球形的突起，并在其根部絞窄而脫落形成一些大小不等,，內(nèi)含胞質(zhì),、細(xì)胞器及核碎片的小體稱為凋亡小體。

4,、支原體集落

支原體無(wú)細(xì)胞壁,，直徑為0.1-0.3μm，且形態(tài)易變,，極易通過(guò)除菌過(guò)濾器,，單個(gè)的支原體無(wú)法顯微鏡觀察，目前已知的主要污染源是動(dòng)物血清,、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠,。來(lái)源廣泛、不易過(guò)濾,、難以觀察,，給細(xì)胞培養(yǎng)帶來(lái)了極大隱患。單個(gè)的支原體無(wú)法從顯微鏡下觀察,，支原體集落卻可以被捕捉到,。

圖6 被支原體集落“附身"的細(xì)胞

5、黑膠蟲(chóng)

談到黑膠蟲(chóng),，大家應(yīng)該都對(duì)他神秘的“身世"有印象,，目前多數(shù)黑膠蟲(chóng)被鑒定為細(xì)菌,，黑膠蟲(chóng)明顯的特征是運(yùn)動(dòng)，但是這里小編要提醒大家,，支原體集落,，可能也會(huì)出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象，詳細(xì)的講述可以查看往期文章,。

視頻 顫動(dòng)的黑膠蟲(chóng)

6,、血清中的物質(zhì)

血清反復(fù)凍融或者經(jīng)過(guò)滅活后，可能會(huì)產(chǎn)生“小黑點(diǎn)",，此外不要認(rèn)為會(huì)增多的一定是微生物污染,，血清質(zhì)量不好，影響細(xì)胞生長(zhǎng),，衰老細(xì)胞增多形成細(xì)胞碎片,，也會(huì)呈現(xiàn)細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)不佳，黑點(diǎn)增多的現(xiàn)象,。

經(jīng)過(guò)分析,，許多老師肯定又覺(jué)得混亂，細(xì)胞培養(yǎng)遇到“顆粒"到底如何應(yīng)對(duì),？

首先,，如果是微生物污染，不重要或者可替代的細(xì)胞,，我們都建議丟棄,，并排查污染來(lái)源，被污染的試劑也要丟棄,，并且對(duì)使用的儀器和環(huán)境進(jìn)行除菌,，比較重要的細(xì)胞，可以用含抗生素的緩沖液清洗過(guò)后,，使用含較高濃度雙抗或三抗培養(yǎng),，嘗試消除，對(duì)于支原體和黑膠蟲(chóng)污染,，使用相應(yīng)的支原體清除劑和黑膠蟲(chóng)清除劑進(jìn)行處理,。

圖7 愛(ài)必信污染清除系列產(chǎn)品

其他情況我們建議優(yōu)先排查血清質(zhì)量，特別是更換血清批次的,，選擇質(zhì)量好的血清也是細(xì)胞培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵所在,，除非實(shí)驗(yàn)特殊要求，其他情況下,，不建議對(duì)血清進(jìn)行滅活處理,。而細(xì)胞正常凋亡產(chǎn)生的碎片，可以低俗離心分離完整細(xì)胞和細(xì)胞碎片，參考條件為300-500rpm 3min,，根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整,，可以用緩沖液清洗幾次,。

圖8 愛(ài)必信胎牛血清

最后需要注意的是某些細(xì)胞正常培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一些“顆粒"物質(zhì),，屬于正常現(xiàn)象,，老師們一定要多查閱資料,，熟悉培養(yǎng)細(xì)胞的特性。

本期就講到這里了,，歡迎公眾號(hào)后臺(tái)留言,，一起探討細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題。

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